이화여대 생명과학실험1 A+ 레포트_ ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)

소개

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목차

Ⅰ. Introduction
II. Materials
III. Methods
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction
실험목표: OVA antigen을 ELISA로 정량하고 4PL 곡선을 통해 농도-흡광도 관계를 분석한다.

1-1. ELISA 원리
Figure 1. ELISA에서는 일반적으로 capture antibody를 multi-well plate 표면에 고정시켜 분석하고자 하는 항원을 포획한다. 이후 해당 항원은 biotin이 결합된 detection antibody에 의해 인식되고 결합되며 여기에 streptavidinHRP가 추가로 결합되어 최종적으로 효소 반응을 통한 색 변화를 유도하게 된다.
ELISA는 enzyme-linked immunosorbent assay의 약자로 효소를 이용해 항체-항원 반응을 검출하는 대표적인 면역학적 분석법이다. 항원-항체 간의 높은 특이적 결합을 기반으로 하며 분석 대상이 되는 항원은 실험에 앞서 고체 표면에 고정된다. 이 고정은 항원을 직접 흡착시키거나 capture antibody를 먼저 고정한 뒤 항원이 이에 결합하도록 하는 방식으로 이루어진다. 이후 항원에 결합 가능한 detection antibody가 처리되며 이 항체에는 효소나 형광 분자가 결합되어 있어 반응을 검출할 수 있도록 한다.
ELISA는 일반적으로 96-well 또는 384-well 플레이트 위에서 진행되며 이러한 플레이트 구조는 항원을 고정할 수 있는 안정적인 고체 표면을 제공한다. 분석 대상이 플레이트 표면에 고정됨으로써 시료 내 다른 성분들과 효과적으로 분리되어 반응이 일어나며 이를 통해 여러 시료를 동시에 처리할 수 있는 고효율 분석법으로 널리 사용된다.

1-2. ELISA 종류
① Direct ELISA
Direct ELISA는 분석 대상에 결합하는 항체에 일반적으로 HRP(Horseradish Peroxidase)나 AP와 같은 효소가 직접 표지되어 있는 형식의 면역 분석법이다. 실험에서는 분석 대상인 항원을 플레이트 표면에 고정시키고 그 항원에 특이적인 단일 항체를 처리하는데 이 항체는 효소와 직접 결합된 형태로 사용되어 분석 대상과 직접 결합하기에 별도의 2차 항체 없이도 효소 반응이 가능하다. 항체가 항원과 결합한 이후에는 기질을 첨가하여 효소 반응에 따른 색 변화를 유도하고 생성된 색의 강도를 측정함으로써 시료 내 항원의 존재 여부와 농도를 정량할 수 있다.

참고자료

· AAT Bioquest. (n.d.). Four Parameter Logistic (4PL) Curve Regression Online Calculator.
· Retrieved May 27, 2025, from https://www.aatbio.com/tools/four-parameter-logistic-4pl
· curve-regression-online-calculator
· Partrita. (2021). ELISA data analysis with Python. Retrieved from
· https://partrita.github.io/posts/ELISA-python-analysis/
· Assay Genie. (n.d.). ELISA Assay - Principles, Methods, Kits & Analysis. Retrieved May 27,
· 2025, from https://www.assaygenie.com/elisa-assay-principles-methods-kits#ELISATypes
· Abcam. (n.d.). What is an ELISA? Retrieved May 27, 2025, from
· https://www.abcam.com/en-us/technical-resources/guides/elisa-guide/what-is-an-elisa
· ELISA Tests. (n.d.). Data Analysis for ELISA Assays. Retrieved May 27, 2025, from
· https://www.elisatests.in/data-analysis-for-elisa-assays/
· Thermo Fisher Scientific. (n.d.). ELISA Blocking Buffers and Reagents. Retrieved May 27,
· 2025, from https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life
· science/antibodies/immunoassays/elisa-kits/elisa-blocking-buffers-reagents.html
· Thermo Fisher Scientific. (n.d.). ELISA Troubleshooting Guide. Retrieved May 27, 2025,
· from https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein
· biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein
· methods/overview-elisa/elisa-troubleshooting-guide.html