competent cell 예비, 결과레포트

소개

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목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 실험 이론
4. 시약 및 기구
5. 실험방법
6. 참고사항
7. 참고문헌
8. 실험 예상결과 및 고찰

본문내용

1. 실험 제목
Competent cell
2. 실험의 목적
Competent cell은 cloning 실험에서 많이 쓰이는 물질이다. 자연상태에서 미생물의 형질전환 효율은 매우 낮은 편이기 때문에, 연구자들은 도입하고자 하는 외부 DNA가 삽입된 Vector(플라스미드)를 받아들여 형질전환이 용이하게 되도록 화학적으로 처리된 대장균 세포(E-competent cell)를 제조한다. 줄여서 cp cell이라고 부르기도 한다. 랩에서 사용하는 competent cell의 양이 많다보니 적절한 균주를 이용해 직접 cp cell을 만들어 사용하는 것이 일반적이다.
따라서 실험에서 유용하게 사용하기 위해 Competent cell의 제조 방법을 익혀야 한다.

3. 실험 이론
3-1. competent cell
정상적인 세균에 인공적으로 화학처리를 하여 외부에서 DNA가 들어갈 수 있게끔 만든 세포를 말한다. 그래서 이 세포를 형질전환능력을 가진 세포라고 하며 활성화세포 또는 수용성세포로 부르기도 한다.
3-2-1. competent cell 방법 -박테리아에 대한 DNA도입 방법
-Chemical Transformation(화학적 형질전환): (CaCl2, DMSO, MgCl2, PEG, RbCl 등)를 통하여 열충격(heat shock)을 일으키는 방법이다. 세포막은 인지질 이중층으로 되어있으며 음전하를 띄고 있다. 삽입하고자 하는 DNA 또한 당인산 골격이 음이온을 띄고 있으므로 Competent cell의 세포막과 DNA의 전기적 상호반발로 인해 도입이 어렵다. 이때 염화칼슘 등을 첨가해줌으로써 칼슘이온이 삽입하고자 하는 DNA를 둘러싸게 되고 전기적 반발을 매우 감소시킬 수 있다. 이후 42도씨에서 짧은 시간 열을 가해주면 인지질 이중층이 느슨해져 양이온으로 둘러싸인 DNA가 E.coli cell 내로 삽입이 된다. 그 후 얼음에 incubating 함으로써 다시 Cell wall을 닫아준다.

참고자료

· Introduction to competent cells, by Katharine Martin, Gold Biotechnology@Plasmid
· 플라스미드, 네이버 미생물백과
· [분자생물학실험] Competent cell 제조 방법, by 식과사전, 2022.7.14
· Competent Cell(수용성 세포)의 정의와 원리, transformation(형질전환) 방법, 원리 및 장단점, https://youtu.be/xOKEoRZlFHc?si=wE6c8EqEarmB_7xC
· competent cell, 네이버 미생물학백과
· 형질전환, transformation, 네이버 식물학백과
· Introduction to Competent Cell Transformation, ThermoFisher SCIENTIFIC
· LA 배지, 위키백과
· 용어) LB 배지 (LB plate), LB/KAN 배지 (LB/KAN plate), 점핑맨, 네이버블로그 2024.8.6
· DH5-알파 셀, 위키백과
· Nguyen, Minh Thanh. "The effect of temperature on the growth of the bacteria Escherichia coli DH5α." Saint Martin’s University Biology Journal 1.5 (2006): 87-94.
· DH5α Chemically Competent E. coli, enzynomics competent cell 제품 설명서
· 염화 칼슘, 위키백과/네이버 화학백과
· 원심 분리법 [centrifugation] 네이버 동물학백과
· 냉장형 마이크로원심분리기-microcentrifuge M1324R RWD사 제품소개, 싸이노믹스, 2024.9.10
· 원심분리, 위키백과/네이버 화학백과
· 진탕배양기 [shaking incubator, 振盪培養器] (생명과학대사전, 초판 2008., 개정판 2014., 강영희)
· EM-SI Series 진탕 배양기 브랜드-EUM
· 트리스(히드록시메틸)아미노메테인, 위키백과