sogang 1-3 full report

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. References

본문내용

I. Abstract
위 실험에선 효소의 반응에서 영향을 미치는 요인을 확인하기 위하여 β-galactosidase로 인한 β-1,4-linkage 가수분해의 촉매 반응을 사용했다. 분해될 시에 황색을 띄게 되는 O-nitrophenol (;ONP)을 만드는 기질인 Ortho-nitrophenyl-β-D-galactoside (;ONPG)을 이용했다. 효소 반응의 상수와 그 3차구조에 온도는 큰 영향을 미칠 수 있다. pH도 기질과의 결합을 이루는 active site residue나 효소 구조에서 영향을 미칠 수 있다. β-galactosidase, ONPG의 반응을 이룬 후에 Na_2 CO_3를 사용하여 5분마다 그 반응을 종결했다. 이후 시간에 따라 420 nm의 흡광도 측정을 통해 효소 반응 속도를 얻어내었다. pH, 온도, 기질 농도에 따른 반응속도를 측정해서 이것을 Michaelis-menten equation, Lineweaver-burk plot로 나타내어 K_m과 V_max를 계산했다. 실험 결과를 보면 온도의 증가에 따라 반응속도가 증가하다가 37도에서 최댓값을 보이고 이후로 감소하며, pH는 7.3에서 최댓값을 찍고 이 부근과 멀어질수록 그 속도의 감소가 일어나는 것을 확인했다. 기질 농도가 증가할 때 초반엔 그 증가폭이 크다가 후반부에선 효소 포화로 점차 그 증가폭이 작아지는 것을 확인했다. 전체적으로 전부 이론에 부합하는 결과를 얻었음을 확인했고 실험에서 그다지 큰 오류가 발생하지 않았음을 알 수 있다. 이러한 실험 결과로 얻어낸 반응속도를 활용해 Michaelis-Menten Equation을 구하고 x축으로 기질 농도, y축으로 반응속도 역수를 취하여 Lineweaver-Burk plot을 도출했다. 추세선 식으로 얻어낸 기울기와 y절편으로 Vmax= 11.8 , Km= 329.9 의 값을 얻었다.

참고자료

· David L. Nelson, Michael M. Cox (2018), 레닌저 생화학(상) 제7판, 월드사이언스, pp.27-28, pp.188-191, p.193, pp.198-202,
· Neil A. Campbell, Lisa A. Urry, Michael L. Cain, Steven A. Wasserman, Peter V. Minorsky, Jane B. Reece (2017), Biology A Global Approach, 11th edition, Pearson
· john E. Dowd, Douglas S. Riggs (1965). “A Comparison of Estimates of Michaelis-Menten Kinetic Constants from Various Linear Transformations”. Journal of Biological Chemistry. pp. 864-868