[생화학 실험]효소의 활동도 측정

소개

효소 활동도를 측정한 뒤 작성한 실험 보고서입니다
최종목적은 그 효소의 활성과 관련한 흡광도를 재서 계산 한 결과를 가지고 Michaelis-Menten 그래프와 Lineweaver-Burke Plots을 그려보는 것이었습니다
보고서에 이론뿐만 아니라 결과 및 분석을 자세하게 기록했구요 고찰과 참고문헌도 충실히 기록했습니다
이론부분에는 여러그림을 스캔하여 첨부하였구요
결과 및 고찰 부분에는 엑셀을 이용하여 만든 그래프(제 실험결과)도 첨부하였습니다
내용요약에 보면 중간 중간 단어가 빠진 것처럼 느껴지는 부분은 한글에서 수식을 이용한 부분이기 때문이구요
많은 도움 되길 바래요 ^^
아울러 좋은 평가도 부탁드립니다

목차

1. 실험제목

2. 실험목적

3. 서론
(1) 효소의 정의
(2) 촉매반응
(3) 효소동력학
(4) 효소-기질 복합체의 형성
(5) 효소의 분류
(6) Michaelis-Menten Kinetics (효소작용의 반응속도론)
(7) Lineweaver-Burke Plots (=Double reciprocal plot)
(8) 효소 활동성에 미치는 요인들
(9) 실험 시 사용했던 효소: lactate dehydrogenase (LDH)
(10) Isozyme과 조효소 (coenzyme)
(11) NAD+, NADH의 흡광도
(12) 좀 더 알아보기

4. 실험재료 및 방법

5. 실험결과

6. 고찰

본문내용

(8) 효소 활동성에 미치는 요인들
① 온도
일반적으로 효소의 활동성은 온도에 따라 그림과 같이 변한다.
<그림> 효소활동과 온도와의 관계
상당히 낮은 온도에서 와 온도와의 관계는 다음과 같이 식으로 나타낼 수 있는데, 여기서 는 절대온도의 역수에 비례한다는 것을 알 수 있다.
그러나 상당히 높은 온도에서는 효소 단백질의 변성에 의해 일반적으로 는 감소한다.
② pH
대부분의 효소들의 활동성은 매질의 pH에 따라 크게 다르다. 따라서 효소의 분석은 완충용액에서 실행해야 한다. 효소반응의 pH 의존성은 효소 또는 기질의 작용기들의 이온화도의 변화의 결과에서 온다.
③ 보조인자들
많은 효소들은 그들의 작용을 위해 느긋하게 결합된 유기인자들 또는 금속이온을 필요로 한다. 효소를 정제하는 과정에서 이러한 보조인자들을 첨가하는 것을 잊지 말아야 한다. 왜냐하면 효소 정제의 각 단계에서의 효소분석에 있어서 효소가 활성을 가지려면 보조인자들이 있어야 하기 때문이다.
④ 효소분석에 적합한 효소의 농도범위
<그림> 효소촉매반응의 시간과정
어떤 출처에서든 효소를 분리 시에는 각 단계의 제조물에 존재하는 효소 양을 결정해야 한다. 우리는 이것을 pH, 온도 및 첨가된 이온 등이 고정된 어떤 조건하에서의 효소의 촉매 활동도를 측정함으로써 간접적으로 달성할 수 있다.
Michaelis-Menten 식을 변형한 다음 식을 살펴보면 효소의 양을 간단히 구할 수 있음을 알 수 있다.
<식>
여기서 는 초기의 기질농도이며, 는 총효소(E+ES)의 농도이다. 와 은 주어진 효소계의 상수들이고 는 분석조건으로부터 이미 알려진 값이므로 초기속도 는 에 정비례한다. 그러므로 를 정확하게 측정해 효소농도를 결정 할 수 있다. 를 얻는 가장 간단한 방법은 높은 농도의 기질을 사용함으로써 분석하는 동안 생기는 기질의 감소를 무시할 수 있는 조건, 즉 가 항상 와 같다고 볼 수 있는 조건에서 분석 할 수 있다.

참고자료

· 김향 외, 2003, 생화학, 문운당, 서울
· 한국생화학회, 1999, 실험생화학, 개정3판, 탐구당, 서울