Km value determination

목차

1. introductions
2. materials
3. methods
4. Results & Discussions
5. Assignment
6. references

본문내용

3. Methods

1. 기준실험
15mL의 베네딕트 용액을 이용하여 다음 두 생성물을 적정하여 반응생성물의 양을 계산할 때 기준으로 삼는다.
① 100mL 삼각플라스크에 15mL Benedict 용액을 넣고 알코올램프로 끓이다가 1g의 Na2CO3를 넣어 녹인다.
② 0.01M, 0.05M의 포도당과 과당을 각각 Benedict 용액에 조금씩 넣어가며 알코올램프로 끓이면서 Benedict 용액의 푸른색이 없어질 때까지 정량한다.
[참고] 원래 뷰렛으로 정량해야 하지만, 뷰렛은 아랫부분에 눈금이 없어 정확한 측정이 어렵다. 따라서, 1ml와 200ℳL 피펫을 이용하여 시료를 조금씩 넣는다. 푸른색이 없어지는 순간을 판별하기가 조금 어려운데, 시료를 조금 더 넣어도 색 변화가 없다면, 그 전에 넣은 양까지로 정하면 된다.

2. 측정실험
① 각 시험관에 정해진 대로 실험용액을 넣는다.
② 37℃에서 물 중탕하여 10분간 보관한다.
③ 각각에 효소액 2mL씩을 첨가한 후 아래 위가 섞이도록 잘 흔들어준다. (1분 간격)
다시 항온수조에 넣는다.
④ 6분 후 1% NaOH 용액 1mL씩을 첨가하여 효소반응을 억제시킨다.
⑤ 100mL 삼각플라스크에 15mL Benedict 용액을 넣고 알코올램프로 끓이다가 1g의 를 넣어 녹인다. 시험관 내의 시료를 Benedict 용액에 조금씩 넣어가며 알코올램프로 끓이면서 Benedict 용액의 푸른색이 없어질 때까지 정량한다.
[참고] 원래 뷰렛으로 정량해야 하지만, 뷰렛은 아랫부분에 눈금이 없어 정확한 측정이 어렵다. 따라서, 1ml와 200ℳL 피펫을 이용하여 시료를 조금씩 넣는다. 푸른색이 없어지는 순간을 판별하기가 조금 어려운데, 시료를 조금 더 넣어도 색 변화가 없다면, 그 전에 넣은 양까지로 정하면 된다.
⑥ V를 구한다.
⑦ Km 값을 구한다.

참고자료

· ▶ 생화학, Jeremy M. Berg ; John L. Tymoczko ; Lubert Stryer [공]저 ; 박인원 외역. 상-하.
· ▶ 핸드아웃
· ▶ 생화학, Lehninger ; Nelson ; Cox [공저] ; 김선희 ... [등]역. 상, 하.