Western blot을 통한 단백질 정량

목차

1. Introduction
2. Materials and methods
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

Introduction
웨스턴 블롯(Western blot)은 immunoblotting이라고도 불리며, 세포나 조직에서 추출한 단백질 혼합물로부터 특정 단백질을 검출하고 정량 할 때 자주 사용되는 면역기반 단백질 분석 기법이다. SDS-PAGE를 통해 단백질을 크기별로 분리한 후, 이를 막(membrane)에 전이(transfer)시키고, 항체를 이용해 원하는 단백질을 선택적으로 검출한다. 최근에는 인산화나 유비퀴틴화 같은 번역 후 변형(post-translational modifications)도 확인할 수 있어 생리적 또는 병리적 상태에 따른 단백질 변화를 연구하는 데 유용한 도구로 사용되어지고 있다.
처음 개발된 이후, 많은 개량을 거친 western blot은 민감도 향상과 함께 형광 및 화학발광 기반의 비방사성 신호 시스템이 주로 활용되고 있습니다. 비록 항체의 특이성 문제나 표준화 부족 등이 한계로 지적되어지고 있으나, 실험 조건을 최적화하고 개량되고 너 나은 항체를 사용할 경우, 재현성 있고 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있다.
본 실험에서는 western blot을 통해 샘플 단백질 3가지에 대한 발현 양상을 분석하고, 이를 통해 western blot을 방법과 원리, 과정 등을 학습하였다.

Materials and methods
D.W
SDS
Tris-HCl
Heat block
Vertex mixer
SDS-PAGE gel
discontinuous polyacrylamide gel(stacking gel, running gel)
discontinuous polyacrylamide gel
PVDF membrane
Transfer buffer
methanol
Filter papers

참고자료

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