[분자세포생물학 실험 A+ 예비 및 결과보고서] Bradford assay & Western Blot

소개글

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목차

1. 실험 제목

2. 실험목적

3. 이론
1) Bradford protein assay
2) Western Blot (WB)

4. 시약 및 실험 방법

5. 실험 결과
1) Bradford assay 실험 결과 -Bradford assay standard curve
2) SDS-PAGE and Wastern Blot 실험결과 - Gel imaging

6. 토의

7. 참고문헌

8. 숙제 Standard curve&추세선 엑셀로 나타내기

본문내용

실험 목표: 단백질 연구를 위한 단백질 정량 법의 일종인 bradford assay를 이용하여 protein을 정량한다. Sample을 전기영동을 이용하여 특정 protein을 분리함으로써 SDS-gel 그리고 buffer의 성분과 원리를 이해한다.

Introduction
3.1 Bradford protein assay
이 분석법은 단백질을 정량, 즉 시료 내에 포함된 원하는 단백질의 양 또는 농도를 결정하기 위해 진행하는 실험이다. 대표적으로 Biuret test(Cu와 peptide 사슬에서의 nitrogen 사이에 배위화합물을 형성함으로서 단백질을 정량하는 방법)와 BAC (Bicinchoninc acid, 단백질에 의한 구리의 환원정도에 따른 흡광도 측정을 통해 단백질을 정량하는 방법)실험을 진행하게되는데, 동시에 많이 사용하는 방법으로 bradford assay 방법이 있다. 이것은 BSA(bocin serum albumin)을 단백질 기준 물질로 사용하여 흡광도를 측정하고 stardar curve를 통해 특정 시료에 단백질이 얼마나 들어있는지 측정하는 방식이다. 이 방법에서 사용되는 Dye 물질로는 Coomassie Blue G-250(CCB) (figure 1)을 사용하는데, 이것은 단백질 염기성 방향족 아미노산 곁사슬(-SO3H) group과 결합하면서 acid한 상태에서 음전하를 띄게 되는 중성으로 변하게 되는데 이 과정에서 갈색(Amax=465 nm)에서 청색(Amax=295 nm)로 변하게 된다. 이러한 흡광도 변화에 따라 다음과 같이 정량화된 curve에서 역으로 단백질의 농도를 결정할 수 있다.

3.2 Western Blot (WB)
SDS-page-gel electrophoresis로 단백질들을 분자량으로 구분하는 방법으로 단백질을 전기영동으로 gel에 분리

참고 자료

https://tipbiosystems.com/tbs/wp-content/uploads/2018/02/AN-LS-004-Bradford-Assay_2017_05_29.pdf
https://www.google.com/search?q=cusabio.com,+western&sxsrf=AOaemvIudfflpZQ0ggIWmKQ4eE2-C6I7Fg:1637909815079&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=2ahUKEwj8mc7FubX0AhXXMN4KHchQBKYQ_AUoAnoECAEQBA&biw=730&bih=701&dpr=1.31#imgrc=auXvhnvo9b4KNM
https://www.youtube.com/watch?v=Yh69yHJMWPc
https://www.youtube.com/watch?v=oaNyyXlKWwU
https://www.anton-paar.com/corp-en/services-support/document-finder/application-reports/dimerization-of-bovine-serum-albumin-as-evidenced-by-particle-size-and-molecular-massmeasurement/
https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/261/593/a2153pis.pdf
https://pubs.rsc.org/en/content/articlepdf/2017/cp/c6cp08809k