[세포생물학및실험] qRT-PCR (A+)

목차

1. 서론 (Introduction)
2. 재료 및 방법 (Materials&Methods)
3. 결과 (Result)
4. 고찰 (Discussion)
5. 참고문헌 (Reference)

본문내용

이번 실험의 목적은 유전자 증폭 기술인 PCR을 활용하여, 기존에 분화시킨 각 type의 세포로부터 합성한 cDNA를 증폭함으로써 해당 유전자가 실제로 존재했는지를 확인하고, qPCR을 통해 DNA가 실시간으로 증폭되는 양을 관찰하여 세포의 분화 유형에 따라 유전자 발현에 차이가 있는지를 확인하는 데 있다.

PCR(Polymerase Chain Reaction)은 DNA의 특정 부분을 복제하고 증폭하는 분자생물학적 기술로, 유전자 분석, 감염병 진단, 범죄 수사, 생물 분류 등 DNA를 다루는 다양한 분야에서 널리 활용된다. 이 기술은 소량의 DNA로부터 수백만 배 이상의 증폭이 가능하다는 장점을 가진다.
PCR은 세 단계로 이루어지며, 첫 번째 단계인 변성(denaturation)에서는 약 90~95℃의 고온에서 DNA 이중 가닥이 단일 가닥으로 분리된다. 두 번째는 결합(annealing) 단계로, 50~60℃의 온도에서 프라이머가 단일 가닥 DNA의 상보적인 부위에 결합한다. 마지막으로 확장(extension) 단계에서는 약 72℃에서 Taq 중합효소가 프라이머 말단부터 뉴클레오타이드를 첨가하여 새로운 DNA 가닥을 합성하게 된다. 이 세 단계를 하나의 주기로 하여 약 25~30회 반복함으로써, 원하는 DNA 단편을 기하급수적으로 증폭할 수 있다. (1)
PCR에서 사용되는 프라이머는 18~25nt 길이의 짧은 단일가닥 DNA 파편으로, 증폭하고자 하는 특정 DNA 단편과 상보적인 서열을 갖는다. 프라이머는 DNA 템플릿에 결합하여 수백만 개의 동일한 복제본을 생성하거나, DNA 서열에 새로운 변화를 유도하는 데에도 활용될 수 있다. 또한 DNA 중합효소는 뉴클레오타이드를 연결하여 새로운 DNA 분자를 생성하는 데 중요한 역할을 한다.
PCR을 수행할 때는 몇 가지 주의사항을 반드시 고려해야 한다. 우선 Forward primer와 Reverse primer 간의 Tm(melting temperature) 차이는 ±3℃를 넘지 않도록 설계해야 한다.

참고자료

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