[기기분석실험] Ultracentrifuge를 이용한 plasmid DNA prep

소개

기기분석실험 당시 작성했던 레포트 입니다~
해당 강의 A+ 받았어요

목차

Ⅰ. Introduction
- Experimental purpose

- Experimental Theory
1. Plasmid
2. 형질전환(Transformation)의 원리
3. Alkaline Lysis, Maxi prep
4. CsCl-EtBr Equilibrium Centrifugation, Isopycnic centrifugation의 원리
5. 원심분리기의 원리, ultracentrifuge

Ⅱ. Experimental Methods

Ⅲ. Results
1.형질전환효율(Transformation efficiency) 계산 결과
2. Plasmid DNA의 정량 및 전기영동 결과

Ⅳ. Discussion

Ⅴ. References

본문내용

1. Plasmid
Plasmid는 세균 세포의 염색체와는 별도로 스스로 복제할 수 있는 DNA 분자이다. Plasmid는 다양한 크기로 존재하며, 모양에 따라 그 종류를 나눌 수 있다. 첫번째로 Open-circular plasmid는 DNA가 원형으로 존재하는 형태로 한 가닥에 틈(Nick)이 존재한다. Relaxed circular는 틈 없이 완전한 원형의 형태로 존재하는 것이다. 선형으로 존재하는 것은 linear DNA라고 한다. 마지막으로 supercoiled(closed-circular) 형태를 가지는 DNA 종류가 있는데, 이는 DNA 가닥이 꼬여 가장 뭉친 상태로 존재하는 것을 의미한다.

2. 형질전환(Transformation)의 원리
형질전환은 외부 DNA를 숙주세포(Host cell)로 도입시켜 새로운 형질을 갖는 세포를 만드는 것을 의미한다. 형질전환 시에는 정상적인 박테리아에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 Competent cell을 이용한다. 외부 DNA를 도입하는 방법은 크게 Electroporation, Heat shock이 있다. Heat shock은 열 충격을 주는 방법으로 plasmid를 도입할 competent cell에 calcium chloride를 처리한 후, 42도 온도에서 90초간 열을 가하는 방법이다. Electroporation은 세포에 전기
장을 가하여 순간 전압을 뒤집어 막의 투과성을 증가시켜 cell 내에 plasmid를 도입하는 방법이다. 이 경우는 따로 calcium chloride 처리를 해주지 않는데, competent cell에 이온이 직접적으로 반응을 해야 하기 때문이다. 효율적인 면에서는 Electroporation 방법이 좋지만, Heat shock 방법이 더 간편하다.

참고자료

· 부성희 외. 생화학실험. 서울: 청문각
· Ethanol Precipitation of DNA and RNA: How it works. 2019년 11월 2일 검색.https://bitesizebio.com/253/the-basics-how-ethanol-precipitation-of-dna-and-rna-works/
· Molecular Biology of the Gene. Watson저. (7판). Cold Spring Haber Laboratory
· Plasmid. 미생물학백과. 한국미생물학회. http://www.msk.or.kr
· pGAL을 이용한 E.coli의 형질전환. THE BIOTECHNOLOGY EDUCATION COMPANY
· 원심분리기의 기본원리. YounginFrontier.