생화학 실험 레포트 - total RNA와 genomic DNA 분리 후 전기영동

소개

생화학실험 당시 작성했던 레포트 입니다~
해당 강의 A+ 받았어요

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Experimental materials and Methods
Ⅲ. Results
Ⅳ. Discussion
Ⅴ. References

본문내용

Plant tissues로부터 total RNA와 genomic DNA를 분리하여 Nano-drop을 이용해 정량하는 법을 익힌다. 준비한 DNA, RNA sample을 agarose gel을 이용해 실제로 전기영동해보고, 원리를 이해한다.

⑴ Isolation and Analysis of Nucleic acids from Plant Tissues
RNA와 DNA의 extraction하는 방법은 서로 차이가 있다. 우선 맨처음에 공통적으로 해주어야 하는 것은 액체질소를 이용하여 세포벽을 파쇄하는 것이다. 어떤 조직이나 세포에서 RNA를 추출할 때 가장 중요한 것은 조직이나 세포가 파괴될 때 나오는 RNase를 불활성화 시키는 것이다. 우리는 phenol과 guanidine isothiocyanate으로 제조한 TRIzol을 사용하였는데, 여기에 포함된 guanidine isothiocyanate는 RNase를 불활성화시켜 RNA가 유지되게 해준다. 이때 사용하는 phenol은 acidic한 특징을 가지므로 산에 약한 DNA가 파괴되게 해준다. 다만 phenol이 층을 완벽하게 나눠주지는 않기 때문에 Chloroform을 추가로 넣어주어 RNA가 존재하는 상층액 층과 phenol층으로 나누어준다. DNA는 중간층쯤에 분리되게 된다. 따라서 중간층이 딸려나오지 않게 상층액만 잘 분리해야 한다. Isopropanol은 DNA와 RNA를 추출할 때 모두 사용되는데, isopropanol을 넣어주면 genomic DNA가 엉기는데, 이것은 hydroxyl group을 포함한 극성용매로 염기 사이의 상보적 수소결합을 방해하여 DNA가 일정한 배열로 존재할 수 없게 만들어주며, 따라서 침전 및 농축되게 하는 역할을 한다.

참고자료

· 곽한식 외. 생화학. (6판). 서울: 라이프사이언스
· 부성희 외. 생화학실험. 서울: 청문각
· DNA and RNA purity. 2019년 11월 14일 검색.
· https://www.promega.kr/resources/pubhub/enotes/how-do-i-determine-the-concentration-yield-and-purity-of-a-dna-sample/