생화학 실험 레포트 - Western Blot (Immunoblotting)

소개

생화학실험 당시 작성했던 레포트 입니다~
해당 강의 A+ 받았어요

목차

Ⅰ. Introduction
- Experimental purpose
- Experimental Theory
⑴ Western blotting analysis
⑵ SDS-PAGE
⑶ Transfer
⑷ Blocking 및 antibody detection

Ⅱ. Experimental materials and Methods

Ⅲ. Results

Ⅳ. Discussion

Ⅴ. References

본문내용

- Experimental purpose
항원-항체 반응의 특이성을 이용해 단백질을 검출하는 방법인 western blot의 원리를 이해하고, 실제 실험을 수행해본다.

- Experimental Theory
⑴ Western blotting analysis
Western blot은 전기적으로 분리된 protein sample에서 antibody를 이용해 얻고자 하는 단백질을 검출하는 방법이다. 우선 protein을 SDS-PAGE을 통해 분리하여 membrane에 옮긴 후, primary antibody와 결합시킨다. 그 다음에 이 항체와 반응하는 secondary antibody를 결합시켜 최종적으로 얻고자 하는 target protein을 검출한다. Western blot은 원하는 단백질을 찾는데 antibody가 이용되므로 “immunoblot“이라고도 한다. 우리가 사용한 항체는 α-TUB antibody이며, 이러한 monoclonal antibody 외에도 polyclonal antibody도 이용할 수 있다. Western blot은 target protein에 대한 특이성뿐만 아니라, 단백질 검출 방법의 감도가 전기영동에서의 단백질 검출에 주로 사용되는 방법보다 훨씬 민감하기 때문에 소량의 단백질도 검출 가능하다는 장점이 있다. Western blot은 혼합 단백질 시료의 정량 분석시 유용하게 사용된다.

⑵ SDS-PAGE
단백질은 전기영동을 통해 분자량에 따라 분리될 수있다. 단백질을 분리하는 경우에는 일반적으로 계면활성제인 sodium dodecyl sulfate(SDS)를 넣은 polyacrylamide gel을 이용한다. 이러한 전기영동법을 SDS-PAGE(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis)라고 한다. 단백질은 SDS와 결합하면 아미노산 잔기당 거의 1분자의 SDS가 붙게 된다.

참고자료

· 곽한식 외. 생화학. (6판). 서울: 라이프사이언스
· 부성희 외. 생화학실험. 서울: 청문각
· Weaver. 분자생물학. (5판). 서울: 라이프사이언스
· Western blot. 분자·세포생물학백과. 한국분자·세포생물학학회. 2019년 11월 5일 검색. http://www.ksmcb.or.kr/