(A+레포트)[화공생물공학단위조작실험1] 6.Enzyme kinetic assay-Horseradish Peroxidase(결과)

소개

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목차

1. Results
2. Discussion
3. References

본문내용

본 실험은 시간에 따라 변화하는 샘플을 일정 간격의 시간마다 측정해 미생물의 생장과 효소 활성 등을 확인하는 Kinetic Assay이다. 분광광도계 이용해 흡광도를 측정하여 효소 HRP에 의한 기질의 변화를 관찰하고 효소 반응속도론 Michales-Menten equation을 이용해 Vmax, Km, Kcat 값을 구하였다.
실험 결과 희석 후 기질의 농도가 클수록, 반응이 진행될수록 흡광도가 증가함을 확인할 수 있었다(표1, 그래프1). 흡광도는 효소반응 과정에서 형성되는 효소-기질 복합체의 농도와 비례한다. 즉, 시간이 지남에 따라 모든 용액의 효소-기질 복합체의 양이 증가하며, 반응속도가 느려지는 양상을 띠는 것을 알 수 있었다.
그러나 예외적으로 기질의 농도가 100uM인 용액의 초기 흡광도가 50uM보다 작은 것을 볼 수 있다. 정확한 실험 결과를 얻기 위해서는 모든 ABTS용액에 동시에 H2O2를 넣어 동일한 반응 조건을 형성해야 하지만 기질의 농도가 가장 작은 50uM ABTS용액부터 400uM ABTS용액까지 차례대로 H2O2를 넣었고, 이로 인해 100uM보다 50uM ABTS용액에서 반응이 먼저 진행되면서 50uM ABTS용액의 흡광도 값이 더 크게 측정되었을 것이라 추측해볼 수 있다.
또한 1-(1) 방법으로 보인 바와 같이Vmax, Km, Kcat 모두 음수값으로 비이상적인 실험 결과를 얻었다. 실험 오차가 발생한 이유를 고찰한 결과는 다음과 같다. 앞에서 서술한 바와 같이 정확한 실험 결과를 얻기 위해서는 모든 ABTS용액에 동시에 H2O2를 넣은 후 반응 시간에 따른 흡광도를 관찰해야 한다. 그러나 실험 환경(실험 기구의 부족 및 실험자 인원 부족 등)의 한계로 인해 가장 농도가 작은 50uM부터 반응시켰고 이로 인해 농도가 작은 용액일수록 먼저 반응이 시작되었음을 알 수 있다.

참고자료

· 류근갑, “효소반응속도론 및 열역학”, 울산대학교 출판부, 2004, pp.37-43
· Mary K. Campbell ∙ Shawn O. Farrell, “생화학” 6th.ed, 라이프사이언스, 2009, pp.150-157
· 서정헌, “효소반응속도론”, 민음사, 1988, pp.29-30