분자생물학 실험

소개

"분자생물학 실험"에 대한 내용입니다.

목차

1. Title
2. Purpose
3. Introduction
4. Material
5. Method
6. Discussion
7. Reference

본문내용

1. 3T3-L1 Cell
일종의 stem cell로 지방세포로 분화할 수 있는 pre-adipocyte 형태로 존재한다. 이 세포에 분화유도 물질을 처리하면 adipocyte cell로 분화가 된다. 1960년대부터 Howard Green 박사는 Swiss mouse embryo에서 유래한 3T3 세포 (3T3는 3-day transfer, 즉 3일 간격으로 세포를 떼어 다른 plate로 옮겨, 3×  plating density에서 유래한 이름이다)를 소개하며 그 성질을 조사하다가 그 중 한 clone이 지방축적을 하는 것을 관찰하고 1974년 Cell 1에 발표하였다.

2. Trizol
Trizol reagent에는 phenol guanidinium thiocyanate (RNase 저해제) 와 함께 들어있다. Trizol에 들어있는 페놀은 acid phenol 이어서 단백질을 변성시키고 지질 을 녹여서 세포막을 파괴한다. 또한 산성이 강해서 DNA를 변성시킨다. (DNA 추출 시 사용했던 Phenol은 약한 산성) DNA와 RNA는 성질이 조금 다른데, DNA는 알칼리에서는 안정하지만 RNA는 알칼리에서 가수분해가 일어나서 degradation 된다. 반대로, acidic 할 때 DNA는 degradation 되지만 RNA는 안전하다. 그래 서 acid phenol을 처리하면 DNA는 제거되고 RNA만 추출된다.

3. RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)
-RT란 Reverse Transcriptase의 약자이다. PCR에 쓰이는 Taq DNA polymerase는 DNA를 template로 해서 DNA를 증폭하는 효소 (DNA-dependent DNA polymerase) 이므로 RNA로부터 직접 증폭할 수 없다. 따라서 RNA를 template로 할 경우, RNA를 주형(template)으로 하 고 여기에 상보적 DNA를 합성하는 효소를 (RNA-dependent DNA polymerase)인 reverse transcriptase를 처리해서 일단 DNA로 복사한 다음 증폭한다. 그래서 RNA를 PCR하는 방법을 RT-PCR이라고 한다.

참고자료

· https://cafe.naver.com/glorybt/18
· https://blog.naver.com/sanigen/221610917821
· https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=D190722
· https://slidesplayer.org/slide/14693148/