생화학실험레포트_PCR, agarose gel running

목차

Ⅰ. Title

Ⅱ. Date

Ⅲ. Key-word

Ⅳ. Theory
1. PCR
2. DNA 화학 구조
3. DNA polymerase
4. dNTP
5. agarose gel
6. TAE buffer
7. ethidium bromide
8. primer (DNA oligo)

Ⅴ. Regent & Apparatus

Ⅵ. Procedure
1. PCR (Polymerase Chain Reaction
2. DNA Agarose gel Electrophoresis

Ⅶ. Observation

Ⅷ. Result

Ⅸ. Discussion

본문내용

1. PCR
PCR은 Polymerase Chain Reaction의 약자로, 중합효소 연쇄반응이라고도 불린다. 2개의 primer 사이에 낀 DNA 부 분을 시험관 내에서 대량으로 증폭시키는 방법이다. 이를 통하여 단 1개의 세포만 있더라도 DNA를 증폭시킬 수 있고, 클로닝 작업보다 시간을 많이 절약할 수 있다는 장점이 있다. PCR법은 1985년에 Kary B. Mullis 박사에 의하여 개발되 었는데, 세포가 DNA를 복제하는 시스템과 열에 강한 효소를 이용하여 개발한 것이다. 이 PCR법을 활용하여 현재 범죄 수사 뿐만 아니라 게놈 연구 등 분자생물학 분야에 폭넓게 이용하고 있다. 특히 인간의 DNA를 증폭하여 여러 종류의 유전질환을 진단할 수 있는데, 세균이나 바이러스, 진균의 DNA에 적용하여 감염성 질환의 진단 또한 할 수 있다. PCR 은 DNA의 변성(Denaturation), primer의 결합(Annealing), DNA의 신장(Extension)의 총 세 단계로 진행된다. 한 가 닥의 DNA를 중형으로 하여 상보적인 DNA를 합성하기 위하여 두 가닥으로 된 DNA의 2중 나선형에 열(92℃)을 가하 여 한 가닥으로 푼다. DNA 중합효소인 Taq DNA polymerase를 첨가하고 온도를 72℃로 유지하면 primer를 시작점으 로 DNA가 복제된다. 이 과정이 반복하여 진행되면서 DNA의 원하는 부분을 증폭시키는 것이 PCR의 원리인데, 이론적 으로 이 과정이 끝나면 DNA의 양은 2배로 늘어나고 10번만 반복해도 원래 양의 1000배가 넘는 양의 DNA가 생성하 게 된다. DNA 단편을 몇 시간 안에 1개에서 1천억 개로 만들 수 있다.
2. DNA 화학 구조
인산(H3PO4), 디옥시리보스(C5H10O4), 염기로 구성되는 뉴클레오티드의 결합체를 DNA라고 한다. DNA는 두 가닥의 뉴 클레오타이드가 서로 꼬인 이중 나선 구조이다.

참고자료

· Sambrook, Fritsch, Maniatis, Molecular Cloning, 2nd, ed., Cold Spring Harbour.
· 한상기, 일본 인터워크 종합연구소 바이오 동향 연구회, 2001, 바이오 비즈니스, 현암사, p. 110-114
· 김해신, 생화학 실험서, 제2판, 2014, 월드사이언스, p.95~p.96
· 김해신, 생화학 실험서, 제2판, 2014, 월드사이언스, p.101~104