생화학 실험/실습 보고서 (전기영동을 이용한 단백질의 관찰)

소개

"생화학 실험/실습 보고서 (전기영동을 이용한 단백질의 관찰)"에 대한 내용입니다.

목차

[1] 실험 목적
[2] 이론
[3] 실험 시약 및 기구
[4] 실험 방법
[5] 실험 결과
[6] 고찰
[7] 참고문헌

본문내용

[1] 실험 목적
SDS-PAGE의 원리를 이해하고 이를 이용하여 단백질을 크기 별로 분리 및 염색하여 관찰한다.

[4] 실험 방법
<Gel 만들기>
1. 유리판을 조립했다.
2. 아래 표의 조성대로 만든 Lower gel을 위에서 1.5cm 정도를 남기고 붓고 나머지 공간은 70% ethanol 로 채웠다.
3. 30분 정도 후 gel이 굳으면 ethanol을 버리고 3MM paper로 물기를 제거했다.
4. Upper gel을 붓고 기포가 생기지 않도록 주의하여 comb를 꽂고 20분 정도 굳혔다.
5. comb 을 빼내고 well 을 증류수로 씻어준다.
<SDS-PAGE>
1. Protein sample 16μl 와 5X SDS sample buffer 4μl를 섞어주었다.
2. 1의 e-tube를 100°C에서 5분간 끓였다. (끓인 후 Mini centrifuge를 돌려주었다)
3. Gel을 chamber에 넣고 1X gel runnig buffer(TGS)를 채웠다.
4. 각 well에 marker 4μl와 sample 10μl 씩 loading 하였다.
5. Sample이 upper gel과 lower gel의 경계에 나란히 설 때까지 90V로 전기영동하였다. (약 20분)
6. 경계에 걸린 것을 확인하고 150V로 전기영동하였다. (약 1시간)
7. Gel의 거의 끝까지 내려가면 유리판을 분리하여 gel을 떼어낸다.
8. 떼어낸 gel을 coomassie blue에 넣고 하루 정도 shaking하여 staining 하였다.
9. Gel을 증류수로 씻어내고 destaining solution으로 2시간 정도 shaking 하여 destaining 하였다.
10. Gel에 나타난 protein의 band와 marker를 비교하였다. (후에 실습실에서 확인하였다)

<주의사항>
- TEMED는 촉매(gel이 굳어지게 함)로 gel을 만들기 직전에 넣고 잘 흔들어 섞은 후 바로 유리판에 붓는다.
- Lower gel 위에 70% ethanol을 가하면 gel의 수평도 유지되고 마르지 않는다.
- Loading 할 때는 특히 주의하여 홈에 액체를 잘 넣도록 한다.

참고자료

· 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, SDS-PAGE
· 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, Isoelectric focusing
· 지식백과 생화학백과, Isoelectric focusing
· 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, Two-dimensional electrophoresis
· 지식백과 생명과학대사전, Coomassie Blue