생화학 실험/실습 보고서 (동물세포의 배양 및 관찰)

소개

"생화학 실험/실습 보고서 (동물세포의 배양 및 관찰)"에 대한 내용입니다.

목차

[1] 실험 목적
[2] 이론
[3] 실험 시약 및 기구
[4] 실험 방법
[5] 실험 결과
[6] 고찰
[7] 참고문헌

본문내용

[1] 실험 목적
동물 세포 배양에 대해 알고 실험을 통해 세포의 계대배양 기술을 익힌다.

[4] 실험 방법
① 현미경으로 MCF-7 cell을 관찰한다
② 100 파이 dish를 기울인 후 피펫에이드(피펫1)로 dish 안의 media를 버린다
③ 피펫에이드(피펫2)로 1X PBS 4mL를 넣고 dish를 살살 흔들어 워싱한다
*PBS를 넣을 때 바닥을 향해서 넣지 않고 세포가 떨어지지 않게 하기 위해 벽면을 따라 넣도록 한다
④ 피펫에이드(피펫2)로 dish를 기울여 PBS를 모두 버린다
⑤ 1000μL 마이크로피펫을 이용해서 1X trypsin-EDTA solution 1mL를 dish에 가한다
⑥ cell이 붙어있는 dish 바닥에 ⑤에서 넣어준 solution이 잘 퍼지도록 골고루 흔들어준 후 37°C 오븐에 3분간 넣어둔다
⑦ 오븐에서 dish를 꺼낸 뒤, dish를 기울여서 마이크로피펫으로 media 2mL를 뿌리고 피펫으로 up&down하며 cell을 모은다
*기포가 생기면 cell에게 스트레스를 줄 수 있기 때문에 피펫 안에 용액이 모두 차거나 모두 나가지 않도록 주의한다
⑧ dish 안의 media(+trypsin-EDTA)를 뚜껑에 조 이름이 쓰인 15mL conical tube에 옮긴다
*Media를 옮길 때 거품까지 다 옮길 필요는 없다
⑨ 원심분리기에 ⑧의 tube를 넣고 1000rpm으로 2분간 돌린다
⑩ 원심분리기에서 tube를 조심스럽게 빼낸 뒤 마이크로피펫을 이용해 상층액을 버린다
*이때 cell pellet을 건들지 않도록 주의한다
⑪ 마이크로피펫으로 media 2mL를 취해 tube에 넣어준 뒤, up&down하면서 pellet을 풀어준다
*피펫 안에 용액이 모두 차거나 모두 나가지 않도록 하면서 기포가 생기지 않게 주의한다
⑫ 새로운 100파이 dish에 피펫에이드(피펫3)를 이용하여 media 6mL를 넣는다
⑬ Media가 들어있는 새로운 dish에 ⑪의 cell 혼탁액을 1mL 정도 넣고 잘 섞이도록 살살 흔들어 준다
⑭ 37°C, CO2 5%incubator에 넣고 배양한다 (실험에서는 생략했다)

참고자료

· 네이버 지식백과 생명과학대사전, Fetal Bovine Serum
· 네이버 지식백과 분자·세포생물학백과, Cell line
· 네이버 지식백과 두산백과, Cell line
· ATCC, “MCF-7 ATCC”, https://www.atcc.org/products/htb-22, 2024.04.02
· 네이버 지식백과 생명과학대사전, Phosphate Buffered Saline
· 네이버 지식백과 미생물학백과, 페트리 접시