Plasmid DNA의 제한효소 절단 및 전기영동

소개

"[일반생물학실험] Plasmid DNA의 제한효소 절단 및 전기영동"에 대한 내용입니다.

목차

Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials and Methods
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. References

본문내용

플라스미드는 vector 의 한 종류로, 염색체와는 독립적으로 존재하는 원형의 DNA 이다. 스스로 복제할 수 있고, 유전될 수 있으며 외부의 유전자를 포함해 전달될 수 있다. 제한효소는 DNA 를 자를 수 있는 효소를 말하는데, DNA 분자의 특정한 염기서열에 결합해 DNA를 절단한다. 이렇게 절단된 DNA 조각은 전기영동을 통해 분리될 수 있는데, 미리 크기를 알고 있는 DNA ladder 를 사용하면 분리된 DNA 조각의 크기를 유추할 수 있다.
전기영동을 통해 Gel을 통과하는 DNA 분자의 이동 속도는 DNA 분자의 크기, agarose의 농도, DNA 구조, 가해진 전압, ethidium bromide 의 유무, agarose 의 종류, 사용한 buffer 에 따라 결정된다. Agaros의 농도가 높을수록 크기가 작은 조각을 분리해낼 수 있다.
한 개의 e-tube 에는 플라스미드와 증류수, 다른 한 개의 e-tube 에는 플라스미드와 제한효소, buffer 와 증류수를 넣는다. 반응할동안 agarose 를 TAE buffer(Tris-Acetate-EDTA buffer)에 넣어 녹이고, redsafe 를 넣어 섞는다. Gel 틀을 조립하고, 틀에 부어 굳힌다. 굳은 agarose gel 위에 1mm 까지 잠기도록 TAE buffer 를 붓고, 전기 영동기에서 약 40 분간 반응시킨다. Gel 위에 있는 홈에 각각 DNA ladder 와 처음에 만든 두 개의 e-tube 속 용액을 넣고, 150V 로 30~40 분간 전기영동을 실시하고, 전기영동 후 gel에 UV를 쬐어 관찰한다.
DNA ladder 와 비교하여 DNA 조각의 크기를 유추할 수 있었다. 또한, 절단하지 않은 DNA의 band 크기는 절단한 DNA band의 크기보다 큰 것을 알 수 있었다.

참고자료

· Martha R. Taylor(2021), 캠벨 생명과학 개념과 현상의 이해, 제 10판, 라이프사이언스, pp. 236~238,
· p.209
· Lee PY, Costumbrado J, Hsu CY, Kim YH.(2012), Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA
· fragments, doi: 10.3791/3923. PMID: 22546956; PMCID: PMC4846332.
· 강호일, 전기영동 최신 프로토콜, 월드 사이언스, 2006, pp. 14~25