마우스 genotyping 실습레포트

소개

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목차

Introduction

Materials and Methods

Discussion

References

본문내용

(1)Agarose gel을 사용한 전기영동의 원리
전기영동법은 크기와 전하에 다른 핵산 및 단백질의 절편의 분리, 식별 및 정제를 위한 실험 방법이다. 핵산은 (-)전하를 가지고 있어서 DNA 샘플을 아가로스 겔에 로딩하고 buffer 안에서 전기를 흘려보내면 DNA는 (+)극으로 이동하게 된다. 아가로스 겔의 그물 구조에 의해 큰 사이즈의 DNA는 천천히 이동하고 작은 DNA는 더 빠르게 이동한다.

<중 략>

-DNA 크기에 따라 아가로스를 정량하여 겔을 만들어야 한다. 높은 농도의 아가로스 겔은 촘촘한 그물망이 만들어지므로 DNA의 통과속도가 느려지고 더 작은 크기의 DNA를 크기별로 분류할 수 있다. 아래의 표는 DNA 크기에 따른 적절한 아가로스 겔의 농도이다.

<중 략>

-주로 사용되는 완충용액은 TAE(Tris acetate EDTA), TBE(Tris-borate-EDTA) buffer가 있다. TAE의 경우, DNA의 분자량이 큰 경우에 사용되며, TBE는 작은 경우에 사용된다. DNA의 전하는 전기영동 시 이용되는 buffer의 pH에 영향을 받으므로 적절한 농도의 buffer사용의 중요하며 일반적으로 0.5x~1x로 희석하여 사용한다. buffer의 농도가 높으면 전하량이 커져 이동속도가 빨라지지만 열이 발생하므로 주의해야 한다.
-DNA band의 정확한 크기를 확인하기 위해서는 적절한 전압이 필요하다. 전압이 높을수록 DNA의 이동속도는 빨라지게 되지만, DNA band의 휘어짐이 나타날 수 있어서 적절한 전압과 시간을 맞춰야 한다.

(2)PCR
-Polymerase Chain Reaction의 약어로 중합효소 연쇄반응이라고 한다. DNA 또는 RNA의 특정 영역을 대량으로 복제, 증폭시키는 기술이다.

참고자료

· https://www.sciencedirect.com/topics/biochemistry-genetics-and-molecular-biology/agarose-gel-electrophoresis
· https://en.wikipedia.org/wiki/Genotyping
· http://www.biod.co.kr/application/genotyping/
· https://app.jove.com/v/5160/mouse-genotyping?language=Korean
· https://local.koreasci.com/download/manual/101_kor.pdf
· https://www.jax.org/Protocol?stockNumber=028020&protocolID=25488