Western Blotting 레포트

소개

EGFR과 HA tag를 포함한 pBabe plasmid vector를 HEK-293T cell에 transfection시킨 후, lysis하여 lysate을 생성하고, transfection이 잘 되어서 EGFR gene이 발현되었는지, 또 만들어진 Protein의 양은 얼마나 되는지 Western blotting을 통해 확인한 실험에 대한 레포트입니다.
레포트에 시간을 많이 들여 A+ 받았던 과목이기 때문에, 도움이 되실 거라 생각합니다.

목차

1. Background
1-1 Western Blotting
1-2 Sample preparation
1-3 Gel preparation 및 Electrophoresis
1-4 SDS-PAGE
1-5 Transfer
1-6 Buffer (Sample loading buffer, Running buffer, Transfer buffer)
1-7 Blocking
1-8 Abs reaction
1-9 Detection

2. Purpose and Method ------------------------
2-1 Purpose
2-2 Method

3. Result -------------------------------------
3-1 Western blotting band picture
3-2 Conclusion and Discussion

4. Reference ----------------------------------

본문내용

1-1 Western Blotting
1) 정의
- 단백질을 감지하고, 양을 확인하여 분자량을 측정할 수 있는 방법
- 찾고자 하는 단백질의 antigen epitope과 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)만을 찾아내는 방법
- 단백질을 polyacrylamide gel에서 electrophoresis를 이용하여 분리하고, nitrocellulose membrane에 옮긴 후, 찾고자 하는 단백질의 primary antibody와 primary antibody와 반응하는 secondary antibody를 이용하여 band를 형상화하는 과정
2) 특징
- Protein sample을 얻는 Sample preparation, Electrophoresis를 위한 Gel preparation, Transfer, Antibody reaction 등의 여러 개별 단계가 포함된다.
- Southern Blot이나 Northern Blot 과정에는 대개 Agarose gel electrophoresis를 포함 하는 반면, Western Blot은 SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)를 포함한다.
- 여러 단백질 중에서 원하는 단백질만을 시각화하여 검출하는 방법으로 fluorescence (fluorescein isothiocyanate), enzyme reaction (peroxidase, alkaline phosphatase, glucose oxidase), radioactivity 등의 방법이 이용되고 있다.

참고자료

· Western Blot, 분자세포생물학백과
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5569289&cid=61233&categoryId=61233
· Western Blot, 다인바이오주식회사
· http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=14&sfl=wr_subject&stx=west&sop=and
· Cell lysis, 생명과학대사전
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1612025&cid=50317&categoryId=50317
· Bradford assay, BIO-RAD
· https://www.bio-rad.com/ko-kr/applications-technologies/western-blotting-sample-preparation-techniques?ID=PQEEHGSCUMB7
· SDS-PAGE, 분자세포생물학백과
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5751411&cid=61233&categoryId=61233
· Transfer buffer, BIO-RAD
· https://www.bio-rad.com/ko-kr/applications-technologies/western-blotting-transfer-techniques?ID=PQEEOP70KWE7
· Trans blot, BIO-RAD
· Trans-Blot Turbo Transfer System – Bio-Rad