분자생물생화학실험_IPTG, 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험

소개

"분자생물생화학실험_IPTG, 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험"에 대한 내용입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials & Methods
Ⅲ. Result
Ⅳ. Conclusion(Discussion)
Ⅴ. Reference

본문내용

<IPTG>
IPTG란, Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside의 약기로 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다[1].
<Buffer condition>
Tank buffer
전기영동장치에 채우는 Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-base)이온이 들어간다. Glycine은 아미노산의 성질로 인해 음전하를 띠거나 net charge가 0인 쌍극성 이온 형태로 존재한다. gel에 형성된 well에 단백질 시료를 가하고 전기영동을 시작하면 Cl-이온과 단백질, Glycine 이온이 모두 (+)극을 향해 출발한다. 그런데 glycine은 stacking gel의 낮은 pH에서 다시 평형을 이루어 일부가 쌍극성 이온이 되어버리기 때문에 이 부분에서 움직이는 이온이 없어지고, 결과적으로 전류가 감소한다. 그러나, 전체 gel의 전류는 유지되어야 하므로 이를 극복하기 위해서 Cl-이온과 glycine 사이에 매우 높은 전압차가 형성된다. 따라서, 상대적인 이동속도는 glycine<단백질<Cl-이 된다. Cl-은 작기 때문에 빠르고, 단백질은 glycine보다 크지만 음전하가 많아서 빠르다. Running gel에서는 glycine은 높은 pH로 인해 거의 모두 음전하가 되고 gel의 농도가 높아 단백질이 크기에 따라 분리가 된다. 따라서, 이동속도는 단백질<glycine<Cl-이 된다[2].

참고자료

· 강영희. 2008. 생명과학 대사전. 아카데미서적. p.1980.
· 한국임상병리교수협의회. 2005. 최신 진단분자생물학실습. 청구문화사. p.35.
· 김영희. 2018. 분자생물학 실험서. 월드사이언스. p.210.
· 부성희 외 3명. 2015. 생화학실험. 청문각. p.72.
· 안정선 외 2명. 2014. 분자생물학. 월드사이언스. p.722.
· 정해영. 2001. 분자세포생물학*분자의학. 월드사이언스. p.296.
· 경희대학교 생물학과 외 공저. 2010. 일반생물학 실험. pp.289, 291.
· 박용철 외 2명. 2013. 생물학 실험서. 국민대학교출판부. p.106.
· 권순일 외 3명. 2016. 임상 분자생물학. 정문각. pp.189-191.