[화학실험] 아미노산의 적정

목차

1. Abstract
2. Introduction
① Theory
② Procedure
3. Apporatus & Chemicals
4. Discussion
5. Reference

본문내용

단백질 지도를 만들기 위해서는 추출된 단백질을 gel에서 2차원적으로 분리하는 방법이 많이 사용된다. 이 때 한 차원에서는 sodium dodecylsulfate-polyacrylammide gel electrophoresis(SDS-PAGE)로 분자량에 따라 분리하고, 다른 차원에서는 이와는 수직 방향으로 isoelectric focusing 방법을 사용한다. SDS-PAGE에서는 모든 단백질 표면에 음전기를 가지는 계면활성제(anionic surfactant)인 SDS를 달라붙게 하고 전기장 하에서 3차원적으로 그물 구조를 가진 gel을 통하여 양극으로 움직이게 한다. 분자량이 작은 단백질은 빨리 움직이고 분자량이 큰 단백질은 느리게 움직이기 때문에 분리가 일어나는 것이다. Isoelectric focusing이란 단백질마다 전기적으로 중성이 되는 pH가 조금씩 다르다는 사실을 이용해서 단백질을 분리하는 전기영동 방법의 하나이다. Isoelectric focusing이 일어나는 방향으로는 gel의 pH가 산성에서 알칼리성까지 연속적으로 변하도록 되어있어서 단백질이 전기장에서 이동하다가 자신의 등전점(isoelectric point; 전기적으로 중성이 되는 점)과 같은 pH에 도달하면 이동을 멈춘다. 두 가지 단백질이 분자량과 등전점이 모두 같을 확률은 거의 없기 때문에 많은 단백질 지도의 작성이 가능한 것이다. 아미노산들의 펩타이드 결합으로 이루어진 단백질의 등전점은 각각의 아미노산의 등전점에 의해 결정된다. 단백질의 전체적인 전하는 각각의 아미노산의 전하의 합이기 때문이다.

아미노산의 pKa는 수용액 내의 짝산과 짝염기의 농도가 같을 때의 pH라는 것은 Henderson - Hasselbalch equation을 살펴보면 알 수 있다. 적정곡선 상에서 보면 염기를 가하여도 pH가 그다지 변화하지 않는 변곡점에서의 pH가 아미노산의 pKa이다. 이렇게 아미노산 용액을 염기성 용액으로 적정하면 적정곡선을 통해서 당량점과 pKa를 찾을 수 있다.
오늘 실험에서는 aspartic acid, phenylalanine, lysine 세 가지 아미노산에 대하여 NaOH 용액으로 적정한 그래프를 얻어, 각 아미노산의 pKa값과 당량점을 구하고 실험에 쓰인 아미노산을 알아낸다.

참고자료

· http://www.cheric.org/ippage/e/ipdata/2001/12/file/e200112-10.hwp
· http://www.khp.ac.kr/study/%C1%A4%BC%BA%C1%A613%C1%D6%20%B0%AD%C0%C7%B3%BB%BF%EB.hwp
· 두산세계대백과사전