RNA prep and cDNA synthesis 레포트

목차

1. 서 론
1) Transfection
2) HEK293T cell
3) PEI
4) GFP
5) Total RNA preparation
6) Nano-drop
7) Electrophoresis – DNA와 RNA
8) Reverse Transcription
9) cDNA
10) Reverse Transcription PCR
11) Housekeeping gene

2. 재료 및 시약

3. 결 론

4. 고 찰

본문내용

Transfection이란 바이러스의 핵산이나 플라스미드 벡터를 정제하여 진핵세포 내에 도입하는 것을 의미한다. 만약 도입되는 세포가 진핵세포가 아닌 원핵세포일 경우 형질전환(transformation)이라고 한다. 인지질 이중층으로 구성된 세포막은 인산기로 인해 전체적으로 전기적 음성을 띄게 되어 음전하 물질을 막는 역할을 하는데, 핵산도 마찬가지로 음전하를 띠고 있어 자발적으로 세포막 내로 핵산이 도입되는 것은 매우 어려운 과정이다. 그러므로 대부분의 실험에서는 진핵세포의 세포막을 통과시키기 위해 화학적, 물리적, 혹은 생물학적 방법을 이용한다.
가장 먼저 Reagent based method, 화학적 방법으로는 cationic lipids, calcium phosphate, cationic polymer, DEAE-Dextan 등을 이용하는 방법이 있다. 그중 가장 쉽게 사용할 수 있는 방법 중 하나가 calcium phosphate를 사용하는 것이다. 인산 이온을 포함하고 있는 염수용액과 transfection할 표적 DNA를 포함하는 염화칼슘 용액과 혼합시킨다. 이때 칼슘과 인산이 반응하여 침전물을 형성하면서 그 표면에 DNA가 결합한다. 이 침전물을 수용성 세포에 첨가하여 수용성 세포가 침전물의 일부와 함께 표적 DNA를 흡수하게 하는 것이 그 원리이다. 그 다음으로 Instrumental based methods, 물리적 방법으로는 전기천공법(Electroporation)과 미량주사법(Microinjection) 등이 있다. 전기천공법이란 전기장을 세포막에 가하여 세포막의 투과율을 일시적으로 증가시키는 방법이다. 이는 세포를 transfection을 시킬 때 매우 효율적인 방법이지만, 많은 유전자의 발현에 영향을 미칠 수 있다는 단점을 지니고 있다. 미량주사법은 살아있는 세포에 핵산을 인젝터를 이용하여 직접 도입하는 방법이다. 이 외에도 세포막에 기공을 형성하여 물질을 도입시키는 소노포레이션(Sonoporation) 방법을 사용하기도 한다.

참고자료

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