[생화학, 생명과학, 분자생물 실험] PCR(중합효소연쇄반응) (한글버전)

소개

"[생화학, 생명과학, 분자생물 실험] PCR(중합효소연쇄반응) (한글버전)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Introduction
A. PCR의 원리
B. DNA polymerase
C. Thermal cyclers

2. Materials

3. Method
A. PCR primer의 디자인
B. PCR 과정

4. Troubleshooting

5. References

본문내용

PCR은 짧은 시간에 single strand DNA 분자를 수백만 개의 복사본으로 증폭시키는 생화학적 과정을 이용한 기술이다. 증폭과정은 총 3단계를 거쳐 진행된다.

1) Denaturation은 이중 가닥의 주형을 분리하는 과정이다. 합성된 primer가 주형 DNA에 결합하기 위해 이중 가닥의 DNA가 단일 가닥으로 분리시키기 위해 90 ℃ 이상의 높은 열을 가해 분리시킨다.
2) Annealing은 분리된 단일 가닥에 합성된 primer가 결합하는 과정이다. 약 70 ℃ 이하온도로 낮춰 합성된 primer가 단일 가닥으로 분리된 주형 DNA의 상보적 서열에 결합하게 된다.
3)Extension은 DNA 중합 효소에 의해 주형 DNA을 따라 새로운 DNA를 합성하는 과정이다. DNA polymerase는 primer가 결합된 주형 DNA를 따라 primer의 3’말단 이후로 주형 DNA의 상보적인 서열을 연장해 새로운 DNA를 합성한다.

참고자료

· Brock TD, Freeze H (1969) Thermus aquaticus gen. n. and sp. n., a nonsporulating extreme thermophile. J Bacteriol 98(1):289–297.
· Chien A, Edgar DB, Trela JM (1976) Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus. J Bacteriol 127(3):1550–1557.
· Saiki RK, Scharf S, Faloona F et al. (1985) Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science 230(4732):1350–1354.
· Smithsonian Institution Archives. The history of PCR (RU 9577)
· Waters DL, Shapter FM. The polymerase chain reaction (PCR): general methods. Methods Mol Biol. 2014;1099:65-75. doi: 10.1007/978-1-62703-715-0_7. PubMed PMID: 24243196.