일반생물학실험 REPORT_Plasmid mini-prep

소개

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목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 ( Introduction )
4. 실험에 사용된 기구 및 재료 ( Materials )
5. 실험 방법 ( Methods )
6. 실험결과 ( Results )
7. 고찰 ( Discussion )

본문내용

실험 제목 : Plasmid mini-prep & Restriction enzyme & Electrophoresis

실험 목적 : Mini-prep를 이용하여 Bacteria의 Plasmid를 분리해보고 Electrophoresis를 통해 Restriction enzyme의 작동 여부와 그 원리를 이해한다.

이론 ( Introduction )
-플라스미드는 세균을 비롯해 많은 생물들이 염색체 외에 추가로 갖고 있는 DNA 조각으로 크기가 상대적으로 작고 스스로 복제할 수 있는 능력이 있어 클로닝할 때 유용한 벡터로 활용되고 있다. 숙주의 성장과 생식과정에 필수적이지는 않지만 종류에 따라 항생물질 등에 대한 저항성 유전자, 접합에 관여하는 유전자, 새로운 대사를 가능하게 하는 유전자들을 가지고 있어 숙주세포에 선택적 이점을 갖게 해주기도 한다.
플라스미드를 분리하는 방법을 매우 다양하게 개발되어 있으나 기본적인 원리는 플라스미드 DNA가 염색체 DNA에 비해 작으며 환상 DNA라는 특성을 이용하는 것이다. 알칼리성 용균(Alkaline lysis method)방법은 1979년에 번보임(Birnboim)과 돌루(Dolu)등에 의해 대장균에서 플라스미드를 분리하는 것으로 개발된 이후 지금까지 사용되고 있는 방법이다. 세균을 높은 pH에서 강한 음이온 세정제인 SDS로 처리하여 세포벽을 깨고, 플라스미드 DNA를 상등액으로 유리시킨다. 이때, 염색체 DNA와 단백질, 깨진 세포벽 등은 SDS와 함께 커다란 침전물을 형성하게 되며 이는 원심분리에 의해 제거된다. 알칼리성 용액에서 플라스미드 DNA도 이중가닥이 풀릴 수 있지만 공유결합 폐환상(Covalently closed circle, CCC) 형태여서 완전히 외가닥으로 풀리지 않으며 중성 용액으로 옮기면 다시 이중나선을 형성하게 된다.

 플라스미드( Plasmid )란?
 Plasmid는 세균세포의 염색체와는 별도로 스스로 복제할 수 있는 원형의 DNA이다.

참고자료

· 유전학 실험서 / 한국유전학회 / 라이프 사이언스 / 2004 / pp. 123-133
· 위키피디아 검색 – ‘Electrophoresis’ , ‘plasmid mini prep’ , ‘restriction enzyme’
· 연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실 홈페이지
· 켐벨 생명과학 / 전상학 / 라이프 사이언스 / p.674