생화학실험 Tyrosinase 활성 측정

소개

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) Tyrosinase
2) L-DOPA (L-dihydroxyphenylalanine)
3) 효소 활성 측정
4) Michaelis-Menten equation
5) 라인위버-버크 방정식

4. 시약 및 기구

5. 실험 결과

6. 실험 결과
1) pH 6.8의 0.1M Sodium phosphate solution 100 mL를 만들기 위해 아래의 식을 이용하여 필요한 1M NaH2PO4와 1M Na2HPO4를 계산하시오. (Sodium phosphate의 pKa = 7.22) [계산식 필수]
2) 데이터를 정리하여 표를 작성하시오.
3) 2-2의 표를 이용하여 시간에 따른 흡광도 그래프를 그리시오. (x축: 시간, y축: 흡광도)
4) 3-2의 각 농도별 그래프에서 일직선이 되는 구간을 이용하여 V0값을 구하고, 아래의 표를 채우시오. [단위 필수]
5) 4에서 채운 표를 다음과 같이 다시 한번 계산하여 아래의 표를 채우시오. [단위 필수]
6) 5에서 채운 표를 이용하여 그래프를 그리시오. (x축: 1/[S], y축: 1/V0 ; 한 그래프 내에 K.A. 유무에 따른 각각의 그래프를 그릴 것) 그리고 그래프에서 추세선을 구하여 Lineweaver-Burk식에 맞는지 확인하고 Vmax값과 Km값을 계산하시오. (L-dopa 몰질량 = 197.1879 g/mol) [계산식, 단위 필수]
7) 6에서 계산된 값을 토대로 K.A.가 어떤 억제를 하는 저해제인지 적으시오

7. 연구문제
1) tyrosinase의 실제 Km값과 실험 Km값을 비교하고 차이가 있다면 이에 대한 이유를 찾아 적으시오. (Km for L-DOPA : 1.5 mM)
2) 실제 Kojic acid가 어떤 저해제인지 찾고, 실험 결과와 다르게 나왔다면 이유를 찾아 적으시오.

8. 고찰

본문내용

1) Tyrosinase
페놀옥시다아제의 하나로 약 0.2%의 구리를 함유하는 구리단백질이며 산소가 존재하는 곳에서 산화되어 멜라닌을 생성하는 효소이다. 티로시나아제는 O2을 사용하여 티로신, 도파민과 같은 페놀의 산화를 수행한다. 카테콜이 있으면 벤조퀴논이 형성된다. 카테콜에서 제거된 하이드로젠은 산소와 결합하여 물을 형성한다. 기질 특이성은 기질로 티로신 또는 DOPA의 L형만을 사용하는 포유류 티로시나아제에서 극적으로 제한되며, 보조 인자로 L-DOPA에 대한 요구 사항을 제한한다. 티로시나제 효소의 활성 부위 내에 있는 두 개의 구리 원자는 O2와 상호작용하여 기질을 산화시키는 매우 반응성이 높은 화학 중간생성물을 형성한다. 티로시나아제의 활성은 구리 산화효소의 관련 종류인 카테콜 산화효소와 유사하다. 티로시나아제와 카테콜 산화효소는 합쳐서 폴리페놀 산화효소라고 부른다.
출처- 21.10.28 https://en.wikipedia.org/wiki/Tyrosinase

2) L-DOPA (L-dihydroxyphenylalanine)
도파민의 전구체로 타이로신의 수산화에 의해 생성되고 L-DOPA 탈카복실효소에 의해 도파민으로 전환된다. L-DOPA 또는 L-3,4- dihydroxyphenylalanine 은 일부 동물과 식물뿐만 아니라 인간의 정상적인 생물학의 일부로 만들어지고 사용되는 아미노산이다. L-DOPA는 신경전달물질인 도파민, 노르에피네프린(노르아드레날린), 에피네프린(아드레날린)의 전구물질이다. 또한 L-DOPA 자체는 뇌와 CNS에 의한 신경영양성 인자의 방출을 매개한다. L-DOPA는 제조될 수 있으며 순수한 형태로 정신 활성 약물로 판매된다. 약물로는 파킨슨병과 도파민 반응성 디스토니아의 임상 치료에 사용된다. L-DOPA는 반대되는 카이랄성을 가진 D-DOPA를 가지고 있다. 많은 분자가 그렇듯이, 인체는 이러한 이성질체 중 하나만 생성한다.

참고자료

· https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2705500/
· Wenbin Liu, “Study on the interaction of kojic acid with tyrosinase by spectroscopic methods.”, SDRP Journal of Computational Chemistry & Molecular Modelling, 2020년, volume 4, issue 2, pp. 365-375