RT PCR (reverse transcription) / 100점 면역학실험 레포트 (원리, 시약, RNA 추출, cDNA 합성)

소개

면역학실험 100점 레포트 입니다.

내가 원하는 내용이 있나, 궁금하시면
목차 자세하게 작성했으니 참고하세요.
하나하나 꼼꼼하게 원리를 작성했기 때문에
레포트 작성에 많은 도움 되실겁니다!

크게 세 가지 실험을 진행했습니다.
1) RNA extraction
2) cDNA synthesis
3) Detection of PCR products

목차

1. Introduction
1) mRNA, transcription, translation
2) PCR, RT-PCR, real-time PCR (PCR 과정 중 각 온도 범위의 의미 포함)
3) LPS signaling : PRRs와 신호전달로 예상되는 결과
4) TRIzol 용액의 성분 및 cell lysis 원리
5) Primer : oligo d(T) primer, random primer, gene specific primer
6) 전기 영동의 원리
7) conventional PCR : safeview와 ethidium bromide의 원리

2. Material
1) RNA extraction
2) cDNA synthesis
3) Detection of PCR products

3. Method
1) RNA extraction
2) cDNA synthesis
3) Detection of PCR products

4. Result

5. Discussion

6. References

본문내용

1. Introduction
1.1) mRNA, transcription, translation
균이 침입했음을 인식한 세포는 다른 세포에게 이를 알리기 위해 염증을 일으킨다. 우선, 세포의 receptor에서 세균만 갖고 있는 특정한 물질을 인식하여 균의 침투 사실을 인지한다. 이어서 신호전달물질이 활성화되고, 전사 인자(NF 카파비, AP1 등)가 DNA의 염증 관련 유전자에 붙어 해당 유전자를 발현시킨다. 전사를 통해 만들어진 mRNA가 세포질의 리보솜에서 번역되면 사이토카인과 케모카인 같은 염증 관련 단백질이 생성된다. 이러한 세포의 염증 생성 메커니즘에 의해, mRNA의 유무를 보면 세균 침입의 유무를 알 수 있다. mRNA는 단백질을 암호화하는 유전자이자 유전자의 단백질 합성을 지시하는 충실한 전사체다. mRNA가 발견된 세포는 세균이 침입한 세포이고, 발견되지 않으면 세균이 침입하지 않은 세포다.
전사는 두 가닥의 DNA를 주형으로 한 가닥의 RNA를 합성하는 과정을 의미한다. RNA와 DNA 모두 4종류의 염기의 배열로 구성되어 있는데 이러한 염기의 결합이 상보적이라는 특징을 이용하여 RNA를 합성할 수 있다. 반대로 RNA를 기반으로 DNA를 합성하는 것은 역전사라고 한다. 자세한 전사 과정은 다음과 같다. 먼저, DNA를 전사하여 primary DNA transcript를 만든다. 이에 cap, tail을 더하고 intron을 빼는 RNA 가공과정을 거쳐 mature mRNA가 만들어진다. Mature mRNA는 최종적으로 리보솜에서 번역할 수 있는 형태의 mRNA이다. 완성된 mRNA는 세포질에 있는 리보솜으로 이동하여 번역된다.
번역은 mRNA의 염기서열을 바탕으로 리보솜에서 아미노산을 이용하여 폴리펩타이드를 합성하는 과정을 의미한다. 번역에는 mRNA, tRNA, 리보솜이 함께 작용한다. 먼저 Ribosomal subunit이 mRNA에 binding한다. 그러면 리보솜은 아미노산들을 연결하며 mRNA를 따라 이동한다.

참고자료

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· 네이버 지식백과, buffer, 2022.05.03.
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· Thermo Fisher Scientific, TAE buffer, 2022.05.03
· https://www.thermofisher.com/search/results?query=TAE%20buffer&focusarea=%EC%A0%84%EC%B2%B4%EA%B2%80%EC%83%89
· EdvoTek, DNA Ladder, 2022.05.03.
· https://www.edvotek.com/search?keywords=dna%20ladder
· MERCK, agarose LE, 2022.05.03
· https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/search/agarose-le?focus=products&page=1&perpage=30&sort=relevance&term=agarose%20le&type=product
· Reginal Bailey, 2019, Translation: Making Protein Synthesis Possible, ThoughtCo., p. 1
· ITSBIO, safeview, 2022.05.03
· http://itsbio.co.kr/?s=safeview&et_pb_searchform_submit=et_search_proccess&et_pb_include_posts=yes&et_pb_include_pages=yes
· MERCK, PCR Master Mix, 2022.05.04
· https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/search/faststart-pcr-master?focus=products&page=1&perpage=30&sort=relevance&term=faststart%20pcr%20master&type=product
· 김수연, 2016, PCR분석을 활용한 분쇄 및 혼합육제품의 원료육 성분 분석기술 개발, p. 3-5