[A+ 리포트] 100pi dish를 이용한 Cell counting and seeding (세포생물학실험)

소개

본 리포트는 100pi dish를 이용한 cell counting 및 seeding에 관한 프로토콜이 자세히 기술된 리포트입니다.
참고 바랍니다.

목차

1. Meterial Preparation
2. Media suction
3. PBS washing
4. Adding Trypsin-EDTA (Trypsinization)
5. Collecting detached cells
6. Centrifuge
7. Supernatant Suction (Media suction)
8. Resuspension
9. Seeding
10. Cell counting
11. Cell counting result & calculation of the cell density and total cell number

본문내용

1. Material Preparation
 본격적인 실험 시작에 앞서 clean bench 내부를 소독하고 후드와 형광등을 작동시킨다.
- 실험 재료 및 기구 : culture medium(이상 DMEM), 50ml conical tube, water bath, microscope, 70% ethanol, 실험용 티슈, rack, clean bench, HeLa cell이 subculture되어 있는 cell culture dish.
1) 37℃로 설정된 water bath에서 실험에 사용될 culture medium이 담긴 50ml conical tube를 37℃의 온도로 유지시킴.
※ 참고사항 : 세포 배양 시 냉장 보관되어 있던 culture medium을 그대로 사용하게 되면 cell에 stress가 가해질 수 있기 때문에 세포 배양 온도와 동일한 37℃로 일치시킴.
2) 과정1)의 50ml conical tube를 70% ethanol로 소독하고 clean bench 내부의 rack에 위치시킴.
3) HeLa cell이 subculture되어 있는 cell culture dish를 microscope의 재물대 위에 올려놓고 배양 상태를 확인함.
※ 참고사항 : cell을 관찰했을 때 화면 상에서 보여지는 cell confluency(가득 찬 정도)가 70~80%인지 확인함.

2. Media suction
- 실험 재료 및 기구 : clean bench, suction 기기, pipette tip(blue), 70% ethanol.
1) Suction 기기의 액체를 직접적으로 흡입하는 부위를 70% ethanol에 짧게 접촉시켜 suction 기기를 소독함.

참고자료

· 없음