서울대학교 생화학실험 - Cloning (실험1) 결과레포트

소개

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Transformation
Colony PCR & Gel Electrophoresis
DNA prep

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Results & Discussion

본문내용

1. Abstract
이번 실험에선 3주에 걸쳐 cloning의 기본 원리를 학습하였다. 첫 주엔 E.Coli를 pCN-Luci plasmid vector로 transformation 하였고, 둘째 주엔 transformation된 E.Coli의 colony PCR을 수행했으며 그 결과를 EtBr gel electrophoresis로 확인하였다. 셋째 주엔 transformation된 E.Coli의 maxiprep과 miniprep을 수행하였다.

2. Introduction
2020년 노벨 화학상이 유전학 분야인 CRISPR Cas9에 수여될 정도로 최근 생화학 분야는 뜨거운 감자이다. 이번 실험에서 생화학의 기초 내용 중 하나인 Cloning의 과정과 원리를 순차적으로 학습했다. 생화학에서 cloning이란 원하는 recombinant DNA (주로 plasmid)를 얻기 위해 수행하는 일련의 과정들을 의미한다. Cloning을 수행하기 위해 본 실험에선 transformation, colony PCR, prep의 3가지 과정을 거쳤다. 우리가 원하는 DNA를 생물이 대신 복제하도록 하고, 이후 추출하는 것이다.
Cloning의 3가지 과정 중 첫 단계인 Transformation에 대해 알아보자. Transformation이란, 생물에 원하는 gene을 가진 plasmid를 삽입해 형질을 전환하는 것을 의미하며, transformation에 적합하도록 modification을 거친 세포를 competent cell이라고 부른다. 이번 실험에선 DH5α라는 E.Coli를 pCN-Luci라는 vector으로 transformation 하였다. 이 때, 육안으로 transformation이 제대로 되었는지 확인하기 어려우므로, E.Coli가 자라는 배지에 항생제의 일종인 ampicilin을 처리하였다.

참고자료

· Jeremy M. Berg Biochemistry, 8th Edition; W.H Freeman and Company, 2015
· Albert L. Lenhinger Principles of Biochemistry; W.H Freeman and Company, 2005