서강대학교 현생실2 E.coli의 TA Cloning, Transformation과 Mini-prep을 통한 Plasmid DNA추출과 제한효소처리 후 젤 전기용동을 통한 Enzyme cut

소개

"서강대학교 현생실2 E.coli의 TA Cloning, Transformation과 Mini-prep을 통한 Plasmid DNA추출과 제한효소처리 후 젤 전기용동을 통한 Enzyme cut"에 대한 내용입니다.

목차

I. Abstract

II. Introduction

III. Materials and Methods
1. TA cloning, Transformation
2. Mini-prep
3. Restriction enzyme and Gel electrophoresis

IV. Data & Results

V. Discussion

본문내용

 Abstract
이번 실험에서는 E.coli strain중 하나인 DH5a Cell을 TA cloning과 형질전환을 통해 얻어진 Sample에서 얻은 Plasmid DNA를 Mini-prep 처리해 얻어진 정제된 plasmid DNA를 제한효소 처리하여 절단한 뒤, 젤 전기 영동을 통해 Vector DNA와 Insert DNA를 분리하는 실험을 진행했다. TA cloning을 통한 형질전환의 결과로 Blue colony가 18개, White colony가 1개 보여 이로써 LacZ selection을 진행했으며, White colony sample을 inoculation하여 alkaline lysis를 통한 Mini-prep을 통해 DNA에서 Chromosomal DNA를 제외한 Plasmid DNA를 분리한 것을 젤 전기 영동을 통해 관찰할 수 있었다. 또한 제한 효소인 Hindlll와 Ndel 처리를 통해 Vector에서 Insert DNA를 분리하였으며, 젤 전기 영동을 통한 DNA의 band부분을 관찰하고 그 Gel부분을 잘라 녹여 Spectrophotometer를 통해 관찰한 결과 Insert DNA의 농도는 6.5ug/ml, Vector의 농도는 9.75 ug/ml로 나타났으며, Insert DNA농도가 Vector농도보다 낮은 것을 알 수 있었다. 따라서 형질전환이 잘 일어났고, Mini-prep을 통한 Purification과정이 잘 일어났으며, 제한효소 처리가 잘 되어 Insert DNA가 잘 분리된 것을 확인할 수 있었다.

 Introduction
TA cloning은 Taq DNA polymerase가 PCR의 결과물의 3’-terminus에 Adenine를 붙이는 특성을 토대로, 3’-A overhang과 T 염기 돌출부와의 complementarity를 이용해서 클로닝 하는 기법이다.

참고자료

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