(동국대 의생명공학 / 생명공학 / 생명과학 / 생물학과) Adipose tissue derived mesenchymal stem cell의 증식과 분화

소개

"(동국대 의생명공학 / 생명공학 / 생명과학 / 생물학과) Adipose tissue derived mesenchymal stem cell의 증식과 분화"에 대한 내용입니다.

목차

1. 제목

2. 실험 목적

3. 실험 방법
1) 세포 배양 및 분화
2) 분화된 세포 염색(oil red O staining)

4. 결과
1) 세포 morphology 변화
2) 염색 결과

5. 고찰

본문내용

3. 실험 목적
Adipose tissue derived mesenchymal stem cell를 증식 배지와 분화 배지에서 각각 배양한 후, 분화배지에서 Ad-MSC가 지방세포로 적절하게 분화되었는지 여부를 확인하기 위한 실험이다.

4. 실험 방법
세포 배양 및 분화
• Cell thawing
1) 액체질소에 들어있는 cryotube vial을 꺼내 water bath에서 빠르게 녹여준다.
2) 해동한 vial 1mL를 9mL 배양액이 들어있는 50mL conical tube에 옮긴다.
3) Centrifugation(1300rpm, 3min) 후 상층액 제거, 10mL 배양액 추가로 넣어 Pipetting
4) 100mm 세포배양접시에 세포현탁액을 넣어주고 CO₂ incubator에서 배양한다.

• Media change
1) Low +/+ media를 water bath에서 10-20분 동안 warming 한다.
2) Warming된 low +/+ media를 70%와 cell culture dish를 clean bench 안에 넣는다.
3) Cell culture dish 뚜껑을 열고, 45° 기울여서 media를 제거한다.
4) Dish에 새로운 배지 10mL를 넣고 뚜껑을 덮어 CO₂ incubator에 넣는다.

• Cell dissociation
1) culturedish의 세포배양액을 석션으로 제거하고 PBS로 washing
2) Trypsin/EDTA 1mL culture dish에 넣고 여러 방향으로 기울여 골고루 퍼지게 한다.
3) Culture dish를 CO₂ incubator에 넣고 5분 incubation
4) Culture dish를 tapping 후 세포가 떨어졌는지 현미경으로 관찰한다.

• Cell collection
1) low +/+ media 3mL 넣고, cell suspension을 15mL conical tube에 모은다.

참고자료

· 김재우(연세대학교 의과대학 생화학 – 분자생물학 교실), 대사질환의 연구와 지방세포의 분화, TiBMB-”Metabolic disease”, p7-17
· Caro-Maldonado, A., Tait, S., Ramírez-Peinado, S. et al. (2010) Glucose deprivation induces an atypical form of apoptosis mediated by caspase-8 in Bax-, Bak-deficient cells. Cell Death Differ 17, 1335–1344. https://doi.org/10.1038/cdd.2010.21
· [MERCK] Trilineage Differentiation of Multipotent Human Mesenchymal Stem Cells (MSCs) into Osteocytes, Adipocytes and Chondrocytes
· (https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/cell-culture/mesenchymal-stem-cell-differentiation.html)
· 서초롱, 변종선, 안재진, 이재환, 홍정우, 장상호, 박계원 (2013). 감초추출물의 지방세포와 조골세포에 대한 분화효과. 한국식품영양과학회지, 42(7), p 1016