[유전공학실험] A+레포트 / qRT-PCR 실험레포트

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론
1) real-time PCR의 원리
2) real-time PCR의 결과 분석

3. 준비물
1) 실험 기기
2) 재료 및 시약

4. 실험 방법
1) real-time PCR
2) Gel electrophores

5. 실험 결과
1) 전기영동 결과
2) real-time qPCR 결과

6. 논의 및 고찰
1) qPCR 과정에서 사용되는 2X qPCR master mix의 특징은 무엇인가?
2) real-time PCR 결과를 분석하였을 때, transfection을 가장 효율적으로 할 수 있는 DNA의 양과 시간은 얼마인가?

본문내용

1) 실험 목적
real-time PCR과 전기영동을 통해, cDNA의 발현량을 확인한다.

2) 실험 이론
* real-time PCR (quantitative PCR)
실시간 중합효소연쇄반응 (real-time PCR) 혹은 정량적 PCR (quantitative PCR)이라고 불리는 이 PCR 과정은 시료의 증폭 과정을 주의 깊게 관찰하여 RNA나 DNA 절편이 정해진 역치 수준으로 증폭되는 시기를 실시간으로 측정할 수 있다. 특정 서열의 상대적 사본 수를 추정하기 위해 정량적으로 수행되기 때문에 기존 PCR의 단점인 정략적인 분석이 어렵다는 점을 보완할 수 있다. 탐침의 존재 하에서도 가능하기 때문에 형광탐침을 부착하여, PCR 산물에서 방출되는 형광신호의 양을 측정함으로써 결과를 분석할 수 있다. 형광을 이용하기 때문에 기존 PCR 기계에 형광 광도계가 함께 붙어있다.
어떤 시료에 있는 한 서열이 다른 시료에서보다 더 많으면, 이 시료에서 해당 서열의 증폭에 의해 PCR 신호가 더 빨리 역치 수준에 도달하게 되고, PCR의 각 주기마다 DNA가 지수적으로 증가하다가 평탄구간에 도달한다. 이때 증폭수준이 처음으로 역치 수준을 넘어서는 PCR 주기 횟수인 Ct값을 측정할 수 있다. 단계적으로 희석한 표준시료를 사용하여 real-time PCR을 시행하면 초기 DNA량이 많은 순서대로 증폭곡선이 그려진다. 이 표준시료들의 Ct값을 얻음으로써 검량선을 만들 수 있고, 미지 시료의 Ct값과 이 검량선과의 대조를 통해서 발현량을 알 수 있다. real-time PCR은 조작이 간편하고, 증폭산물을 실시간으로 모니터링하여 해석할 수 있어 신속한 결과를 얻을 수 있다는 장점이 있다. 기존의 PCR법은 전기영동 후 EtBr 등으로 염색하여 확인하기 때문에 민감도가 낮고 정량이 어렵다는 단점이 있었다. 하지만 real-time PCR은 전기영동 없이 실시간으로 형광을 측정함으로서 산물의 양을 측정하기 때문에 정량이 가능하다.

참고자료

· 없음