[화학생물학실험 예비레포트 및 결과레포트] DNA Digestion 및 Ligation, 제한효소 cloning

목차

I. 실험제목

II. 실험 목적

III. 시약 및 기구
1. 시약
2. 기구

IV. 실험 이론
1. DNA Cloning
2. DNA 운반체, 벡터 (Vector)
3. 제한효소 (Restriction Enzyme)
4. DNA 결찰 (DNA Ligation)

V. 주의사항

VI. 실험방법

VII. 실험결과

VIII. 고찰

IX. 참고문헌

본문내용

실험제목: DNA Digestion 및 Ligation, 제한효소 cloning

실험 목적: DNA digestion 및 ligation의 과정과 원리를 이해하고 제한 효소를 이용해 cloning을 시행한다.

시약 및 기구:
1. 시약
1) DNA
2) 10x Buffer
3) Restriction Enzyme
4) Water
5) CIP (Calf Intestinal alkaline Phosphatase)
: DNA 가닥의 5’ 말단으로부터 인산기의 제거를 촉매하는 효소. 5’ 말단에서 인산기를 제거하면 linearized cloning vehicle DNA의 religation과 recircularization을 방지할 수 있다. Cloning할 벡터에 처리해 self-ligation을 예방하는 목적으로 사용하였다.

2. 기구
: Test tube, pipette, gel electrophoresis machine.

실험 이론:
1. DNA Cloning
: 절단, 결합 등의 조작으로 DNA를 세포에 도입하고 복제하는 과정을 통해 DNA 사본을 얻는 유전공학 기법. DNA 운반체인 벡터를 이용해 DNA 조각을 세포에 도입하면 이 세포가 분열을 거듭해 클론을 생성하는데, 이 클론 내 세포들은 모두 동일하다.
1) 외래 DNA 절편을 만드는데 사용한 제한효소로 벡터를 절단
2) Ligase 첨가 후 절단한 벡터와 외래 DNA 절편의 말단이 상보적 결합
3) 플라스미드 DNA의 생성
4) 처리를 통해 투과성이 높아진 세균세포가 플라스미드 DNA 흡수
5) 세균의 세포분열마다 도입된 DNA가 함께 복제
6) 무수히 많은 클론의 생성

2. DNA 운반체, 벡터 (Vector)
: 유전 물질을 인위적으로 운반할 때 사용하는 DNA 분자로, DNA cloning을 편리하게 할 수 있게 해준다. 호스트 박테리아를 이용해 DNA 대량 복제, 증식 또한 가능하다.

참고자료

· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1260728&cid=40942&categoryId=32326 (두산백과, 네이버 지식백과, 방문일: 2021. 10. 06.)
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5141572&cid=60266&categoryId=60266 (생화학분자생물학회, 생화학백과, 네이버 지식백과, 방문일: 2021. 10. 06.)
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5569122&cid=61233&categoryId=61233 (한국분자·세포생물학회, 분자·세포생물학백과, 네이버 지식백과, 방문일: 2021. 10. 06.)