장출혈성대장균 시험 방법(단계별 사진 첨부)

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목차

1. 분석항목에 대한 소개
2. 분석에 들어가기 전 준비사항 및 주의 사항
3. 분석에 필요한 기자재 및 소모품
4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지
5. 분석을 위한 시약 조제
6. 분석을 위한 표준균주
7. 분석 Method
7. 양성구획의 판정
8. SOP Flow Chart

본문내용

1. 분석항목에 대한 소개
본 시험법은 대장균 O157:H7과 대장균 O157:H7이 아닌 베로독소 생성 대장균(VTEC, Verotoxin-producing E. coli)을 모두 검출하는 시험법이다. 장출혈성대장균의 낮은 최소감염량을 고려하여 검출 민감도 증가와 신속 검사를 위한 스크리닝 목적으로 증균 배양 후 배양액(1〜2 mL)에서 베로독소 유전자 확인시험을 우선 실시한다. 베로독소(VT1 그리고/또는 VT2) 유전자가 확인되지 않을 경우 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 베로독소 유전자가 확인된 경우에는 반드시 순수 분리하여 분리된 균의 베로독소 유전자 보유 유무를 재확인한다. 베로독소가 확인된 집락에 대하여 생화학적 검사를 통하여 대장균으로 동정된 경우 장출혈성대장균으로 판정한다.

2. 분석에 들어가기 전 준비사항 및 주의 사항
실험실과 실험대는 항상 청결을 유지하고 실험장비와 기구는 항상 일정한 장소에 보관한다.
실험장비와 기구는 정해진 매뉴얼의 방법에 준하여 사용한다.
Gel 상에서 VT1이나 VT2중 하나라도 PC(Positive Control : 장출혈성대장균)와 같은 위치에 밴드가 생성되면 장출혈성대장균이 있다고 가정하고 생화학실험을 실시하여 균을 동정해야 한다.
PCR 실험을 통해 장출혈성대장균으로 의심되면 TC-SMAC 배지와 BCIG 한천배지에 분리배양하여 진행하면 된다.(동시에 진행할 필요는 없다.)
유전자 분리시 Boiling 단계가 있으므로 열상에 주의한다.

참고 자료

없음