ELISA 효소면역측정법 / 100점 면역실험 레포트 (원리, 실험방법, 종류, 결과분석, 고찰)

소개

100점 맞은 레포트 입니다!

다양한 ELISA 중 sandwich ELISA 실험을 진행하였고
그 결과와 결과 분석이 들어있습니다.
실험 과정 및 실험에 사용한 reagent와 equipment에 대한 설명도 있습니다.

목차

1. introduction
1.1) ELISA (elisa란, 장단점, 종류)
1.2) ELISA의 원리 및 시약의 원리
1.3) 실험에 사용한 cytokine IL-6에 대한 설명

2. Material
2.1) Reagents
2.2) Equipment

3. Method

4. Result
- O.D raw data
- Standard curve
- sample 농도에 따른 IL-6 농도 그래프

5. Discussion

6. References

본문내용

1. Introduction

1.1) ELISA

RT-PCR은 mRNA의 양을 확인하는 방법이며, 이를 통해 균의 침입 여부 및 염증 관련 단백질의 생성 여부를 알 수 있다. 하지만 mRNA가 만들어진 후에 해당 mRNA를 통해 실제로 리보솜에서 관련 단백질이 만들어졌는지는 확인할 수 없다. 세포 단백질의 생성 여부를 직접 확인하기 위해서는 ELISA를 이용해야 한다.
ELISA는 효소 면역 측정법으로, 항체-항원 반응을 이용하여 시료에 존재하는 물질의 양과 항원-항체 반응 강도를 정량적으로 측정할 수 있는 방법이다. 측정 시 사용하는 항체에 효소를 붙여 기질-효소 반응에 의한 색 변화를 일으키는데, 이를 마이크로플레이트 분광광도계를 통해 정량적으로 계산할 수 있다.
ELISA는 1pg까지 검출할 수 있을 정도로 민감도가 매우 높으며, 세포내단백질과 세포외단백질을 모두 확인할 수 있지만 주로 세포외단백질 확인에 사용된다. 만들어진 키트로 간단히 실험을 진행할 수 있으며, 여러 soluble한 물질의 측정에 유용하고 짧은 시간 안에 대량으로 결과를 얻을 수 있다는 장점을 가진다. 보통 96-well plate를 사용하므로 한 번에 96개의 sample 결과를 볼 수 있고 원한다면 여러 개의 well plate를 사용할 수 있기에, 한 번에 매우 많은 양을 측정할 수 있다. 이러한 장점들 덕분에 ELISA는 널리 사용되는 방식이지만, 시간이 지나면 반응 시 activity가 떨어진다는 enzyme/substrate reaction의 특징 때문에 짧은 시간 안에 실험을 끝내 결과를 내야 하며, 순도 높은 enzyme 사용으로 인해 비용이 많이 든다는 단점 또한 갖고 있다.

ELISA는 Direct ELISA, Indirect ELISA, Competitive ELISA, Sandwich ELISA로 나눌 수 있다. Direct ELISA는 바닥에 항원을 고정한 후 해당 항원에 특이적으로 binding하는 항체를 넣는 방식이다. 항체에 달린 enzyme과 기질의 반응을 통해 나타나는 색 변화로 항원의 유무를 확인할 수 있다.

참고자료

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· https://terms.naver.com/search.naver?query=ELISA&searchType=&dicType=&subject=
· 네이버 지식백과, Cytokine, 2022.05.17.
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· Gold Biotechnology, Bovine Serum Albumin (BSA), 2022.05.17
· https://www.goldbio.com/search?q=+Bovine+Serum+Albumin
· Yuhong Xiao and Stuart N. Isaacs, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) and Blocking with Bovine Serum Albumin (BSA) - Not all BSAs are alike, 2012, National Library of Medicine, p. 148-151
· Molecular Devices, Microplate reader, 2022.05.17.
· https://ko.moleculardevices.com/search-results?search=microplate%20reader&t=All
· abcam, HRP secondary antibodies, 2022.05.17.
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· Surmodics, ELISA wash buffer, 2022.05.17.
· https://shop.surmodics.com/search?q=elisa
· Thermo Fisher Scientific, ELISA stop solution, 2022.05.17.
· https://www.thermofisher.com/search/results?query=ELISA%20Stop%20Solution&focusarea=%EC%A0%84%EC%B2%B4%EA%B2%80%EC%83%89
· Immunochemistry, HRP Redox Reaction, 2022.05.18.
· https://www.immunochemistry.com/search?q=HRP%20Redox%20Reaction
· 네이버 지식백과. 황산. 2022.05.18.
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· 조운동, CD66c 특이 sandwich ELISA를 이용한 폐 선암의 진단, 2012, p. 1-15