서강대학교 현대생물학실험1 항체 생산, Western blot

소개

"서강대학교 현대생물학실험1_항체 생산, Western blot"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Data & Results
5. Discussion
6. References

본문내용

Abstract
이번 실험은 3주에 걸쳐 Antigen으로 사용될 eGFP를 Mouse에 Injection하여 면역반응을 통해 생긴 항체를 얻고, SDS-PAGE와 Immunoblotting 방법 중 하나인 Western blot을 통하여 정제된 단백질의 특성을 알아보는 실험이다. 항체는 항원과 반응하여 면역반응을 일으키는 물질로 항원과의 특이적 결합을 이루며, B림프구와 T림프구의 작용으로 진행된다. 항원 물질로 eGFP를 사용하여 adjuvant와 함께 Mus Musculus에 3차까지 접종을 하여 면역반응으로 항체를 생산하고, 혈액을 채취하여 Western blot과정을 통해 생산된 단백질의 특성을 확인한다. 실험과정 Mouse가 죽었으며 깊게 Injection을 했기 때문으로 생각된다. 다른 Mouse로 실험을 진행했으며 Western blot을 통한 실험결과로 30kDa 근처의 eGFP Band가 나타났다. 복강 내 주사 후 좌심실에서 채혈하는 이유를 알아보았고, 혈청이 붉은색인 이유를 알아보았다. 또한 Coomassie blue staining과 Western blot에 의한 민감도 차이로 Protein detection의 차이를 관관찰결과부터 분석해보았다.

Introduction
항체는 항원과의 Specific binding으로 항원-항체반응을 일으키는 병원성 박테리아나 바이러스와 같은 외부 물질을 확인하고 중화시키는 면역시스템에서 사용되는 Y자 모양의 큰 단백질이다. 항체는 병원체의 특이적 분자를 인식하는데 이를 항원이라고 한다. 항원은 Non self로 인식되어 후천적면역유발 물질이다. 항체와 항원은 특이적으로 결합하는데, 이를 ‘항원-항체 반응의 특이성’이라 한다.
각 B Cell의 항원 수용체는 두개의 동일한 Antigen-binding site를 가진다. B Cell의 Antigen Receptor를 Antigen에 결합시키는 B Cell 활성화의 초기단계에서 Receptor의 수용성 형태를 분비하는 Cell의 형성을 이끈다.

참고자료

· Janeway C (2001). Immunobiology (5th ed.). Garland Publishing. ISBN 978-0-8153-3642-6.
· Campbell et al. (2016), Biology, 11th edit., New York : Pearson, p.957.
· David L. Nelson, Michael M. Cox, Lehninger’s Principles of biochemistry, W.H. Freeman, 2004, p175.
· T. A. Brown, Gene cloning and DNA Analysis, an introduction, Wiley-Blackwell, 2016, p153.
· Western blot protocol, abcam.com, https://www.abcam.com/protocols/general-western-blot-protocol, 2021.06.07