생명공학실험 설계 보고서

소개

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목차

1. 설계 목표
2. 실험이론
3. 기술적 동향
4. 실험방법
5. 제한 조건
6. 참고문헌

본문내용

1. 설계 목표

- GFP는 생명과학분야에서 가장 각광받는 유용한 단백질 중의 하나가 되어 매우 다양한 연구에 응용이 되고 있다. 이렇게 GFP가 생명과학분야에서각광을 받게 된 이유로는 GFP가 모든 외래의 세포에서 형광을 발할 수 있는 활성을 가진 형태로 발현되기 때문이다.
따라서 GFP의 작용방식과 이용가치를 이해하고 cell biology, developmental biology, neurobiology 및 cytology 분야에 활용할 수 있도록 연구가 필요하다.

-이 실험에서 이전에 실험에서 사용한 방법들을 토대로 형광유전자의 발현을 확인해본다.

2. 실험이론

GFP

GFP는 다른 생물학적 발광성의 reporter와는 달리 자외선이나 청색광을 쪼여주기만 하면 밝은 녹색의 형광을 발한다. 이러한 녹색형광의 발광은 광단백질인 aequorin으로부터 GFP로의 에너지 전달에 기인한다. GFP는 27 kDa의 분자량을 가지는 238의 아미노산으로 이루어진 단백질이며 주로 395 nm와 약간의 470 nm에서 자외선을 흡수하여 509 nm에서 녹색형광을 발한다.

GFP의 안정성

열에 강하고 (65℃ 이상의 온도에서도 형광이 관찰된다) pH가 7.0 이하에서는 형광강도가 줄어들기는 하나 5.5에서 12.2까지 폭 넓은 pH 범위에서 안정하다.
또한 화학물질에 대한 내성이 매우 강하여 6M guanidium hydrochloride, 8M urea, 1% SDS 그리고 적당한 농도의 유기용매에서도 그 형광을 어느 정도 유지할 수 있다.
GFP를 변성화하려면 chaotropicagents, 강산 또는 강염기 (pH <4 또는 >11) 그리고 매우 높은 온도가 필요하다.
GFP는 pronase를 제외하고는 대부분의 단백질 분해효소에 안정하다.
GFP는 그 발현이 종(species)에 관계없으며 녹색형광을 발하기 위하여 기질이나 보조인자 또는 다른 단백질들을 필요로 하지 않는 장점을 가지고 있어 새로운 genetic reporter molecule로 최근에 널리 연구되고 있다.

참고자료

· 차형준. (2003). 녹색형광단백질의 재조합 단백질 생산공정에의 응용. 한국생명과학회 심포지움, (), 38-47.
· 김주한. "재조합 대장균의 생산과 발현에 관한 고찰." 국내석사학위논문 울산대학교 대학원, 2012. 울산
· 장예진, 지미란, 전미향, 김점순, 김경운, 한덕우, 정학재, 양병철, 류재규, 박진기, 김태완, 변승준. (2012). 형질전환 닭에서 GFP 유전자 전이 연구. 한국가금학회지, 39(3), 241-244.
· 이재화. (2007). 형질전환된 벼세포배양에서 green fluorescent protein (GFP) 생산. 생명과학회지, 17(2), 293-297.
· http://www.expressys.com/main_tools.html : Vector map