겔 추출 예비레포트

소개

"겔 추출 예비레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론
3. 시약 및 기구
4. 실험방법
5. 참고사항
6. 출처

본문내용

1. 실험 목적
- 전기영동한 Gel로부터 원하는 DNA를 추출하기 위해 특정 band만 잘라내어 Gel Purification Kit을 이용하여 DNA를 정제한다

2. 실험 이론

2.1. Gel Extraction
DNA를 전기영동하여 관찰되는 band 중에서 특정한 band를 gel에서부터 유리해내는 기술을 말한다. 이 방법은 재조합 DNA를 만들 때 대단히 중요하게 쓰이는 기술이므로 보다 회수율이 높고 용출(elution)된 DNA의 순수도가 보다 높고, 또한 보다 빠르고 간편하게 실행할 수 있는 방법이다.

Gel에서 DNA를 회수하는 방법은 다양하다

① Low melting temperature agarose method
agarose 중에서 저온에서도 녹는 agarose를 사용한다. agarose를 저온에서 녹여 용액에 녹은 DNA를 분리해내는 방법이다. 다른 방법에 비해 분리되는 DNA 양이 적지만 제한효소나 ligation에 필요한 효소를 gel에 직접 처리할 수 있다는 장점을 가지고 있다.

② Electroelution
전기장을 이용하여 DNA를 분리해내는 방법이다. 주로 Dialysis tubing 방법과 NA-45 membrane 방법을 쓴다. 먼저 Dialysis tubing 방법은 gel 조각을 tube 안에 넣어 전기영동을 시키면 Dialysis tube 안에 DNA가 모이는 것을 이용한 것이다. 현재까지 알려진 가장 불편한 방법이지만 5kb보다 큰 DNA 조각들을 분리하는데 가장 효과적인 방법이고 순수도가 높다. NA-45 membrane 방법은 gel 조각을 NA-45 membrane에 붙여서 전기장을 주면 gel에서 빠져나온 DNA가 NA-45 membrane에 결합하는 것을 이용한 방법이다. 여러 DNA를 동시에 분리하고 0.5kb~5kb 크기의 분리함에 있어서 효율성이 높고 비교적 간단한 방법이다. membrane으로 분리되는 DNA는 순도가 높으므로 거의 모든 용도로 사용이 가능하다

③ High salt extration
6M 정도의 고농도의 나트륨 이온을 사용하여 agrose gel을 녹인 뒤 DNA를 glass에 붙여 분리해내는 방법이다. 주로 glass bead와 glass fiber방법을 사용한다.

참고자료

· [네이버 지식백과] 원심분리 [centrifugation] (식품과학기술대사전, 2008. 4. 10., 한국식품과학회)
· [네이버 지식백과] 완충액 [buffer] (생화학백과)
· [네이버 지식백과] 변성 [denaturation, 變性] (생명과학대사전, 초판 2008., 개정판 2014., 강영희)
· [네이버 지식백과] 아가로스 겔 [agarose gel] (두산백과)
· 생명과학대사전 아가로오스겔(아가로오스젤)
· [네이버 지식백과] 카오트로픽이온 [chaotropic ion] (생명과학대사전, 초판 2008., 개정판 2014., 강영희)
· [Microgiene] 제품정보, TAE buffer (Tris acetate-EDTA)
· [Monarch genomic DNA purification Kit T3010 manual]
· [Bioneer] Accprep PCR/Gel DNA Purification Kit
· [Biosizebio] Ethanol Precipitation of DNA and RNA: How it works
· [AccuPrep_PCR_Gel_Purification_Kit.pdf]
· [UG_EN_AccuPrep_PCR_Gel_Purification.pdf]
· [다인바이오주식회사] 실험자료실, Working with DNA
· https://madscientist.wordpress.com/2016/08/02/%EC%95%84%EA%B0%80%EB%A1%9C%EC%8A%A4-%EC%A0%A4%EC%97%90%EC%84%9C-dna%EB%A5%BC-%ED%9A%8C%EC%88%98%ED%95%9C-%EB%82%A8%EC%9E%90/
· http://blog.daum.net/hohoh2h2/7889443
· https://cafe.naver.com/kductl1/book4814066/960
· https://www.bioneer.co.kr/20-k-3037-cfg.html#producttechnical
· https://m.blog.naver.com/dlstudl/221840055142
· https://blog.naver.com/kirokkk123/90191998706
· http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=dwrkdehddn&logNo=220685632010
· https://www.microgiene.com:9041/shop/item.php?it_id=1480481479
· https://international.neb.com/-/media/nebus/files/manuals/manualt3010.pdf?rev=358a9c46ee4141809ebfddacfddadd9b&hash=7220E4FECD910D7F0E1690DAD01735E8
· https://www.bioneer.co.kr/20-k-3037-cfg.html
· https://bitesizebio.com/253/the-basics-how-ethanol-precipitation-of-dna-and-rna-works/
· https://www.bioneer.co.kr/literatures/manual/prep/AccuPrep_PCR_Gel_Purification_Kit.pdf
· https://www.bioneer.co.kr/literatures/manual/UG_EN_AccuPrep_PCR_Gel_Purification.pdf
· http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=21&sst=wr_hit&sod=desc&sop=and&page=3