바이러스학 실험 결과보고서 Cell harvest & Protein sampling

소개

바이러스학 실험 결과보고서로 Cell harvest & Protein sampling 실험에 대한 결과 보고서입니다.

Cell harvest & Protein sampling 실험은poliovirus에 감염된 BGM cell을 용해시킨 후, 단백질을 추출하고 정량하는 실험입니다. 단백질을 추출하는 이유는 SDS-PAGE를 해서 크기에 따라 단백질을 분리하기 위함입니다.

본문내용은 실험 목표, 실험 방법, 결과 사진, 실험과정에 대한 자세한 설명, 단백질의 양과 lysis,buffer 계산법과 SDS buffer, lysis buffer, Bradford 시약에 대한 설명과 원리 등을 포함하고 있습니다.

목차

1. Title

2. Objective

3. Method
1) Cell harvest
2) Protein sampling

4. Result

5. Discussion
1) SDS(sodium dodecy sulfate)
2) lysis buffer
3) Bradford 시약

6. References

본문내용

1. Title : Cell harvest & Protein sampling

2. Objective : 크기에 따라 단백질을 분리하는 SDS-PAGE를 하기위해서 poliovirus에 감염된 BGM cell을 용해시킨 후, 단백질을 추출하고 정량한다.

3. Method

1) Cell harvest
① 배지를 e-tube에 수거한다.
② PBS로 washing 하고 1ml PBS를 추가한다.
③ Scraper로 긁어 모아 e-tube에 담는다.
④ 5,000rpm/5min centrifugation
⑤ 상등액을 suction해서 pellet을 취한다.

2) Protein sampling
① Pellet에 lysis buffer를 넣는다.
② Voltexing하여 pellet을 살짝 풀어준 후 deep freezer (-80℃)에 15분간 넣어둔다.
③ 37℃ water bath에 살짝 녹인 후 centrifugation (13,000rpm, 15min, 4℃)
④ 상등액을 새로운 e-tube에 옮긴다.
⑤ O.D값을 측정한다.
A. e-tube에 증류수 895ul, protein lysate 5ul, Bradford 시약 100ul를 넣는다.
B. Voltexing후 cuvette으로 옮겨 담는다. (1ml)
C. 측정기계로 O.D값을 측정한다.
⑥ O.D값을 바탕으로 lysis buffer, 5× SDS buffer를 protein lysate에 넣는다.

참고자료

· 남상욱 외 2인/ 유전공학의 이해/ 라이프 사이언스/ p. 192
· https://bio-chae.com/ripa-lysis-buffer/