결과5 Liquid culture & Expression

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 미리 제조한 LB 액체 배지에서 녹색 형광 단백질인 eGFP DNA를 포함하는 재조합된 세포를 배양하고, 이를 Cell Growth Curve와 연관된 적정 O‧D 값(0.6~0.8) 구간에서 IPTG을 주입하여 단백질 발현을 유도하는 실험이다. IPTG는 단백질 발현 과정에서 조절 유전자에서 발현된 억제 물질에 대한 유도 물질로 작동 유전자에 억제 물질이 붙는 현상을 막아주어, 전사 현상 방해를 막아준다. 이를 통해 단백질 정상 발현된다. 해당 실험 결과, 본 조는 재조합된 세포를 넣지 않은 대조군에 비하여 형광 특성을 보이고 있지만, 이론적으로 eGFP DNA을 포함시키는 재조합된 DNA의 녹색 형광을 특성은 보이지 못하였다. 이러한 오차를 보인 이유는 재조합된 DNA의 영향이 가장 큰 것으로 보인다.

2. Experiment
①실험 기구
⑴Flask
⑵Cuvette

⑶Shaking incubator
본 실험에서 액체 배지를 흔들어주어 공기 중 산소의 이동을 촉진해주는 기기이다.
해당 기기는 호기성 세균 및 세포 배양에 사용되는 기기이다.

⑷UV transilluminator & UV spectrophotometer
실험에서 흡광도 측정을 통해 O.D 0.6~0.8인 대수기(logarithmic phase)에 사용된다. 해당 구간에서 조절 유전자를 유발하는 IPTG를 해당 구간에 넣어주어, 결과적으로 eGFP 단백질 발현을 최대로 늘려준다.

②실험 시약
⑴Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside(IPTG) (1000X)
해당 시약은 allolactose을 대신하여 락토스 오페론의 억제인자인 시량체 분자와 결합하여 오페론의 전사를 유발하는 유도체 역할을 해준다. allolactose 달리, -galactosidas 에 의해 가수분해 되지 않아 유전자의 Over expression 가능하다.

참고자료

· 2020년 생물 화공 실험 이론 및 실험’ 실험노트
· Willey, Sherwood, Woolverton, ‘미생물학 제9판’, 2006, (주)라이프사이언스,
· p137~172, p358~371
· Benjamin A. Pierce, ‘유전학의 의해 개념과 원리 제 6판’, 2017, (주) 라이사
· 이언스, p250~260
· 오계헌 외 4명, ‘최신 미생물학 실험 제 2판’, 2010, 신광문화사, p210~220
· Rain M, Maier 외 2명, ‘환경미생물학’, 2004, 동화기술교역, p45~50