결과1 Miniprep 5조 Plasmid DNAisolation from bacterialcell :Miniprep

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 대장균 E.col를 이루고 있는 염색체 DNA와 Plasmid DNA 중, 대표적인 Plasmid DNA 분리 방법인 Miniprep의 방법 중 Alkaline Lysis를 활용한 실험이다. 해당 실험을 통해 추출한 Plasmid DNA 전기 영동법을 통해, 결과적으로 Plasmid DNA의 크기를 확인한다. Plasmid DAN의 선택적 분리를 위해 Miniprep kit 구성하는 S1 buffer, S2 buffer, S3 buffer, PW buffer, EB buffer를 순차적으로 활용한다. 해당 용액들의 역할은 아래 Table 2를 통해 자세히 나타낸다. 본 조의 전기 영동법 실험 결과 추출한 Plasmid DNA 크기는 DNA ladder를 활용하여 비교한 결과 4.0kbp~5.0kbp 범위의 크기에 속하는 것을 확인할 수 있었다. 해당 실험값은 실제 Plasmid DNA 크기 약 6.0kbp에 0.8kbp(eGFP)와 1.7kbp(another gene)의 합 약 8.0kbp보다 상대적으로 작은 값을 가지는 결과이다. 이는 실제 실험에서 사용한 DNA marker가 linear DNA이고, 실제 plasmid DAN는 Super coiled 구조로 좀더 compact한 DNA 구조로써 전기영동 시 실제로는 더 빠르게 이동하기 때문이다. 결과적으로 이는 실험 과정에서 Plasmid DNA의 Super coiled 구조가 완벽하게 분리가 일어나지 않았다는 것을 의미하고, 추가적으로 변성이 일어난 DNA 조각이 있음을 의미하여 실제 Plasmid DNA 크기 값보다 작은 값이 나타난 것이다.

2. Experiment
①실험 기구 및 시약
⑴원심분리기(Centrifuge)
⑵1.5ml micro tube
⑶Micropipette
⑷Spin column
대장균 내 플라스미드 DNA를 해당 기구에 있는 Glass Micro Fiber Filter에 흡착을 통해 분리하는 장치이다.

참고자료

· 2020_생물 화학 이론 및 실험노트
· Willey, Sherwood, Woolverton, 미생물학 제9판, (주)라이프사이언스, p137~172, p358~371
· 유주현 외 1명, 응용미생물학실험, 도서출판효일, p211~250
· Reece 외 3명, 생명과학 개념과 현상의 이해 7판, Pearson, p186~212
· 김민주 외 5명, 일반 생물학 실험, 동아대학교 출판부, p135~154
· 남상욱 외 1명, 유전공학의 이해, 라이프 사이언스, p35~37