[생물화학공학및실험 A+] Plasmid DNA isolation from bacterial cell, Miniprep

소개

[생물화학공학및실험] 첫번째 실험입니다.
[Plasmid DNA isolation from bacterial cell : Miniprep]

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목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
이번 실험의 목표는 본 실험에서는 대장균(E.coli)를 사용하였다.
미생물의 세포벽과 세포막을 부수고 plasmid DNA를 분리하는 것이었다. plasmid DNA는 유전자 재조합 실험에서 재조합된 유전자의 운반체(벡터) 역할을 하는 매우 중요한 요소이며, 본 실험에선 Alkaline lysis method을 사용하였다.
Mini prep 과정을 통해 쉽고 간편하게 얻어낼 수 있다. 본 실험은 LaboPass™에서 제공한 일련의 Protocol을 바탕으로 진행하였으며, 결과의 정확성을 확인하기 위해 얻어진 plasmid DNA를 전기 영동법을 이용하여 Size marker와 비교하였다. 결과적으로 이론 값(8kb)에 훨씬 못 미치는 4kb 크기의 plasmid DNA를 얻어내었다. 마지막으로 이러한 결과 값이 나온 원인을 파악하고 보다 더 정확한 실험 결과를 얻기 위한 방안을 생각해보았다.

2. Experiment

1) 실험 기기
(1) 원심 분리기(Centrifuge Separator)

‣ 회전에 의해 생기는 원심력을 이용해서 시료를 분획하는 장치이다. 균질액을 시험관에 넣고 원심분리기를 고속으로 회전시키면 입자의 크기와 밀도에 따라 물질을 분리할 수 있다.

※ 원심분리기에 시험관을 넣을 땐 항상 대칭으로 넣어 무게중심을 맞춰주어야 한다. 만약 측정하고자 하는 시료가 5개일 경우, 하나는 증류수를 넣어 무게를 맞춰준다.

Figure 1. 원심분리기 내부

(2) 전기영동장치

‣ Agarose Gel에 시료를 넣고 전류를 흘려보내면, DNA는 인산기 때문에 음전하(-)를 띄므로 양극(+) 쪽으로 끌려가게 된다. 이 때 DNA가 통과하는 Agarose Gel은 다공성 물질이기 때문에 일종의 체(여과재)로써 작용하여, 작은 DNA 절편이 더 빨리 이동하게 된다. 이러한 원리를 이용하여 적당한 시간동안 전류를 흘려보내면 DNA 절편을 크기에 따라 분리시킬 수 있다.

Figure 2. 겔 전기 영동장치

참고자료

· LaboPass™, Protocol book, p1~9.
· Bio 101 Inc, Newsletters, Function, Issue 2, Page 3, 1998 Oct 28.
· 김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, PEARSON , p186,210~212.
· Molecular cloning a laboratory manual, J. Sambrook.