Restriction enzyme treatment and DNA digestion과 PCR (polymerase chain reaction) 실험 레포트

소개

본 실험은 restriction enzyme의 작용, PCR의 원리를 알고, 얻어진 DNA fragment product를 electrophoresis를 통해 analysis하는 실험이다. plasmid형태와 linear form DNA의 electrophoresis band형태가 다름을 이용하여, 제대로 restriction된 linear form의 DNA를 electrophoresis결과에서 확인 할 수 있었다.
PCR 실험에서는 primer를 다르게 사용하여 PCR결과 replication되는 size에 변화를 주었고, 그 결과를 이용하여 electrophoresis를 실시한 결과 result part에서 도식화한 것과 같은 primer annealing site를 알 수 있었다.

목차

Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials & Methods
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Referance

본문내용

Ⅰ. Abstract

본 실험은 restriction enzyme의 작용, PCR의 원리를 알고, 얻어진 DNA fragment product를 electrophoresis를 통해 analysis하는 실험이다. plasmid형태와 linear form DNA의 electrophoresis band형태가 다름을 이용하여, 제대로 restriction된 linear form의 DNA를 electrophoresis결과에서 확인 할 수 있었다.
PCR 실험에서는 primer를 다르게 사용하여 PCR결과 replication되는 size에 변화를 주었고, 그 결과를 이용하여 electrophoresis를 실시한 결과 result part에서 도식화한 것과 같은 primer annealing site를 알 수 있었다.

Ⅱ. Introduction

실험에서 사용하는 pcDNA4 His/Max이란 대략 5.3kb(5274b)의 size를 갖는 expression vector(plasmid)이다.
PCR이란 Polymerase Chain Reaction의 줄임말로, DNA polymerase를 이용한다. 목적(forensic science, paternity test)은 다양하지만, PCR을 거치면 결과적으로 연구대상의 interested gene을 대량 얻을 수 있다. 일반적으로 사용하는 base의 size는 0.1~10kb 사이이다. DNA template, Taq polymerase(archeae의 DNA polymerase), template의 3'부분과 binding할 pirmer, dNTP(deoxynucleoside triphosphate), buffer solution(DNA polymerase의 activity높힘), 적정농도의 Mg2+등을 필요로 한다. DNA denaturing -> Annealing -> Elongation 과정으로 진행되며, 단계를 반복할수록 기하급수적으로 복제strand가 늘어난다.

참고자료

· http://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/pcdna4hismax_man.pdf
· http://en.wikipedia.org/wiki/STAT3
· http://www.phosphosite.org/proteinAction.do?id=655&showAllSites=true