plasmid DNA 분리 실험 보고서 (Accu miniprep kit사용)

소개

bioneer의 accu miniprep kit를 사용하여 plasmid DNA를 분리한 실험에 대한 보고서입니다.

목차

1. 실험목적
2. 배경지식
3. 가설
4. 실험재료 및 방법
5. 결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

Ⅰ 실험 목적

Plasmid DNA 분리 실험을 통해 gene cloning 원리를 이해한다.

Ⅱ 배경지식

2.1 plasmids dna의 구조

연구에 많이 활용되는 박테리아 중 대표적으로 대장균이 있다. 대장균에는 두 종류의 유전자가 있다. chromosomal DNA와 plasmid DNA가 그것이다. chromosomal DNA와 plasmid DNA는 모두 이중나선 분자(세포 내부에서 plasmid DNA는 supercoiled 상태로 존재하긴 하지만 기본적으로 이중나선으로 되어있다.)로 독립적으로 분열하지만 여러 기능적·구조적 측면에서 차이를 갖는다. chomosomal DNA는 박테리아의 생존에 필수적인 유전 정보를 저장하고 있는 DNA인데 비해 plasmid DNA는 세균에 필수적이지는 않으며 크기 또한 chromosomal DNA의 8% 이하인만큼 매우 작다.
plasmid DNA는 저항성 유전자를 가지고 있다. 예를 들어, 세균에 항생제처리를 해도 plasmid DNA에 내성이 생기면 박테리아는 살아남을 수 있게 된다. plasmid DNA의 또 다른 특징은, 대부분의 plasmid는 세포 내에서 초나선형(supercoiled) 분자로 존재한다는 것이다. topoisomerase에 의한 복제과정 동안 plasmid DNA의 이중나선 구조가 부분적으로 풀려 초나선형이 된다. supercoiled 구조는 두 개의 polynucleotide 가닥이 완전할 때만, 즉 닫혀진 공유결합성 원형 DNA일때 유지된다. 만약 polynucleotide 가닥 중 하나가 깨어지면, 이중나선 구조는 일반적으로 이완된 상태로 돌아가서 plasmid는 열린원형 구조가 된다.
plasmid DNA를 gene cloning에 사용하는 이유는 제한효소(restriction enzyme) 때문이다. 어떤 종으로부터 흥미 있는 어떤 유전자나 다른 DNA 서열을 서열화하고 클로닝하기 위한 능력은 필수 제한효소에 의존한다. 이 효소들은 매우 특이적 분자 가위같이 작용한다.

참고자료

· Willey et al, 김영민 외 옮김, 『미생물학』 7판, 라이프사이언스, 2008
· 김경훈 외, 『대학 생물학 실험』, 강원대학교출판부, 2007
· T.A.Brown, 『Gene Cloning & DNA Analysis: An introduction』, 6th edition, Wiley-Blackwell Press, 2010
· 네이버 지식백과, “흡광도측정법”, 간호학대사전, 2020.10.12. 검색, https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=484901&cid=60408&categoryId=55558
· 네이버 백과사전, “겔 전기영동”, 두산백과, 2020.10.12. 접속, https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1261192&cid=40942&categoryId=32251