예비1_Miniprep A+ 예비레포트

목차

1. 실험 목적
2. 바탕 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
알칼리 조건하에서 대장균의 세포벽과 세포막을 부수고 유전자 재조합에 필요한 plasmid DNA를 분리해본다. 여기서 추출한 DNA의 크기를 전기영동을 이용하여 측정해보고 결과값을 고찰해본다.

2. 바탕 이론

(1) Plasmid

- Plasmid 란?

Figure 1. Plasmid DNA
Plasmid는 세균의 세포 내에 복제돼 독자적으로 증식할 수 있는 염색체 이외의 DNA 분자를 총칭하는 말로, 환상형 모양을 띠고 있다. Plasmid는 세균의 생존에 필수적이지 않으며, 다른 종의 세포내에도 전달될 수 있다. 이런 성질을 이용해 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한 효소로 자른 뒤 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자 재조합 기술에 사용한다. 분자생물학 기반 실험에서 기본적이고 매우 중요한 실험 재료로 사용되며 특히, 강력한 클로닝 수단으로 사용된다. 용어로는 유전자 재조합의 벡터, Plasmid DNA, 플라스미드 벡터 등, 다양하게 불려지고 있다.
- Plasmid DNA의 특성

Plasmid DNA는 크기가 작고 분리와 조작이 쉬우며, 다른 세포내로 쉽게 도입될 수 있다. 또한 생존에 필수적이지 않고 스스로 복제가 가능하기 때문에 DNA 운반체로 주로 이용된다.
항생제 내성 유전자를 가지고 있는 것이 많아 재조합 DNA를 가진 숙주 세포를 선별할 때 용이하다. 여기서 숙주 세포는 재조합 DNA가 이식되는 살아있는 세포로 주로 대장균이 많이 이용된다. 이는 대장균은 증식 속도가 빨라 짧은 시간에 피룡한 물질을 대량으로 생산할 수 있고, 생물학적인 정보가 많이 밝혀져 있어 대장균의 증식 및 유전자 발현을 쉽게 조절할 수 있기 때문이다.

(2) Miniprep

- Miniprep 이란?

Miniprep은 Mini + Prep(aration)으로 Plasmid DNA를 적은양, 소량을 추출한다는 의미이다. Plasmid DNA를 추출하는 것이 목적이며, pH를 이용하여 DNA를 분리하기 때문에 Alkaline lysis method 이다.

참고자료

· 김민주 외 5명, 일반 생물학실험, 동아대학교 출판부, p135~154
· 김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, Pearson, p186,210~212
· jane B. Reece 외 5인, 캠벨 생명과학 9판(2012), 바이오사이언스, p396~412