포항공대 화학생명공학실험[포스텍 A]Pre-Report (Ligation & Transformation )

소개

포항공대 화학공학과 전공필수 과목인 화학생명공학실험 보고서입니다
PRE-Report 는 실험전 사전지식을 정리하는 보고서이고 Final-Report는 실험후 결과를 정리하는 보고서 입니다.
두가지를 모두 참고하셔서 과제에 도움이 되시길 바랍니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 및 배경지식
4. 시약 및 기기
5. 실험 순서
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험 제목 : Ligation & Transformation

2. 실험 목적
단백질 발현용 벡터에 TA cloning을 완료한 gene을 ligation을 하여 E.coli 에 transformation한다.

3. 이론 및 배경지식
1) Expression Vector
Expression vector는 단백질을 발현시킬 목적으로 host에 넣는 vector이다. 이전 실험에서는 대량 복제를 하기 위해 cloning vector를 썼다. 두 vector의 첫 번째 차이점은 cloning vector 는 promoter의 부재로 인해 유전자에 RNA 중합 효소가 결합하지 못하여 전사가 불가능하다. 둘째, cloning vector는 결합 부위가 둘 다 염기서열 ‘T’ 로 되어있어서 거꾸로 insert가 들어가는 경우가 있다. 셋째, cloning vector는 유전자 복제에, expression vector는 단백질 발현에 쓰인다. Vector에는 Episcopal or plasmid vector, integrating vector등이 있는데 이 중에서 plasmid vector를 주로 실험실에서 사용된다. Plasmid vector의 큰 장점은 항생제 저항 유전자가 있어 selection하기 매우 유용하다는 것이다. 올바른 단백질 발현 벡터를 고르는 기준은 multiple cloning site 와 promotor가 있어야 한다. 그 이유는 전사와 단백질 발현을 하기 위한 최소 조건이기 때문이다. 또한 원하는 방향으로 DNA 가 삽입되어야 하기 때문이다. Replication origin, growth condition, expressional promotor 등 다양한 조건이 충족

참고자료

· Convergence of Molecular, Modeling, and Systems Approaches for an Understanding of the E.coli Heat Shock Response, Eric Guisbert, Takashi Yura, Virgil A. Rhodius and Carol A. Gross, Microbiol. Mol. Biol , 2008, p. 545-554
· Sambrook et al, Molecular Cloning 3rd Ed.,Vol.1, Chapter 1
· Frederick M. Ausubel et al., Current protocols in molecular biology, Vol.1, Unit 1.8
· T. A. Brown, Gene cloning(5/e), Chapter 5, p. 87~106