예비-단백질 정량 분석

목차

1. 실험 목적
2. 바탕 이론
3. 실험 기기 및 시약
4. 실험 방법

본문내용

1. 실험 목적
- 다양한 단백질 정량 분석법에 대해 이해한다. (UV, BCA, Lowry, Bradford법 등)
- Lowry method를 이용해 다양한 농도의 단백질 시료를 정량한다.
- UV/Vis spectrophotometer의 이용법을 숙지하고 이를 이용해 단백질 용액의 흡광도를 측정한다.

2. 바탕 이론
(1) 단백질 정량 분석
정량 분석이란 물질을 구성하는 시료 중 특정 물질의 양적 관계를 이해하는 것을 목적으로 하는 분석이며, 단백질 정량분석은 시료에 포함된 단백질의 양·농도를 구하는 분석이다. 많은 생화학실험에 기본이 되며, UV·Lowry·BCA·Bradford법 등의 다양한 방법이 존재한다.
정성법과의 차이를 비교해봤을 때 정성법이란 시료 내 어떤 성분이 포함되어있는지를 찾는 성분 분석 방법이고, 이번 실험에서 사용되는 정량법은 단백질이라는 현재 알고 있는 성분이 시료 내에 얼마나 존재하는지를 알기 위한 정량 분석 방법이다.

(2) UV method
Phenylalanine, Tyrosine, Tryptophan과 같은 방향족 아미노산의 경우, 자외선 흡수율이 낮은 다른 아미노산과 다르게 280nm의 자외선을 흡수한다. 일반적으로 많은 단백질에서 Phe, Tyr, Trp의 양은 거의 일정하기 때문에 280nm에서 측정되는 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. 50μg~1mg 범위의 단백질 양을 측정할 수 있고, 속도가 빠르고 단백질에 변성이없다는 장점이 있다. 하지만, 아미노산 조성에 따라 결과가 달라지고 pH, 염, purines, nucleic acids, buffer등에 영향을 받기 쉽다는 단점이 있다.

참고자료

· 전현숙, 2004, “단백질 정량을 위한 형광 염료의 합성과 특성에 대한 연구”, 5-15p
· 2018 2학기 화공 기초 이론 및 실험2 실험 노트
· 조영호, 1992, “BCA 정색반응을 이용한 새로운 세포독성 분석법 개발과 항암제 탐색을 위한 그 이용, 8p
· https://blog.naver.com/withcoffee67/70157518737
· https://blog.naver.com/alth0808/20110298805
· MSDS
· 김해신, 2014, “생화학실험서”, 월드사이언스, 215-216p