DNAprep&WholegenomeAmplification
- 최초 등록일
- 2020.03.31
- 최종 저작일
- 2015.10
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목차
Ⅰ. Introduction
1. 실험 목적
2. DNA preparation
3. WGA
4. Phi 29 DNA polymerase
Ⅱ. Materials & Methods
1. DNA prep for tissue
2. WGA
Ⅲ. Results
Ⅳ. Discussion
Ⅴ. Reference
본문내용
Introduction
1. 실험 목적: 구강에서 gDNA를 추출한 후 WGA(Whole Genome Amplification) 원리를 익히고 whole genome을 pH변화를 이용하여 증폭시킬 수 있다.
2. DNA preparation
일반적으로 세포 내에 있는 전체 DNA를 유전체(genomic) DNA라고 한다. 즉 그 생명체가 살아가는데 필요한 모든 유전정보를 담고 있는 DNA를 말한다. DNA를 추출하는 방법에는 여러 가지 방법이 있고 세포조직 및 DNA 구조에 따라 추출방법이 다르다. 본 실험에서는 구강 상피세포로부터 유전체 DNA를 추출하는 방법과 원리에 대해 알아본다.
이번 실험에서는 SLB를 이용하여 세포막을 부수는 방법을 이용한다.
- simple lysis buffer(SLB): 세포의 막을 효율적으로 용해시켜 안의 내용물들이 흘러나오도록 한다. 높은 온도에서 activation할 수 있다.
- proteinase K: DNA에 붙어있는 히스톤 단백질을 없애주는 역할을 한다. 특별히 세포를 lysis 시킬 때 같이 넣으면 genomic DNA와 같은 높은 분자량의 DNA나 RNA를 얻을 수 있는 장점이 있다.
참고 자료
Barker, D.L., et al., Two methods of whole-genome amplification enable accurate genotyping across a 2320-SNP linkage panel. Genome Res., 14, 901-907 (2004)
Blanco L, Bernad A, Lázaro JM, Martín G, Garmendia C, Salas M (1989). "Highly efficient DNA synthesis by the phage phi 29 DNA polymerase. Symmetrical mode of DNA replication"
Esteban JA, Salas M, Blanco L (1993). "Fidelity of phi 29 DNA polymerase. Comparison between protein-primed initiation and DNA polymerization"
