THP-1 cell 배양 및 단백질 발현 측정

목차

1. Introduction
2. 실험 목적
3. Material and Method
4. 실험 결과
5. 실험 고찰
6. References

본문내용

1. Introduction
1) THP-1 cell
THP-1 cell은 급성 단핵구성 백혈병 환자의 말초혈액에서 얻은 monocyte cell line이다. Fc와 complement(C3) receptor을 가지고 있고 식세포작용을 하며 표면과 세포질의 Immunoglobulin이 부족하다. 이들은 분화되기 전 상태의 TLR agonist에 약하게 반응하나, 분화된 후에는 크게 반응하게 된다. 정확한 기능은 아직 알려진 바 없으나, plasma membrane의 inner face에 삽입되어 있고 PKC pathway를 자극하는 신호분자라 생각된다.
- doubling time: 26hrs
2) PS (penicillin streptomycin)
Cell culture시 세균 오염을 예방하기 위해 사용할 수 있다. Penicillin은 원래 진균인 Penicillium에서 정제된 물질로 세균 세포벽 전환을 직접적으로 저해하고 세포벽을 변형시키는 효소 분비를 유도하는 간접 억제 작용을 한다. Streptomycin은 원래 Streptomyces griseus에서 정제된 물질로 세균 리소좀 30s에 결합해 단백질 합성을 억제하고 감수성 높은 세균의 사멸을 유도한다.
3) FBS (Fetal bovine serum)
주로 globular protein, bovine serum albumin이 주요 구성 성분으로 다양한 단백질이 풍부하게 있어 cell culture 시 세포가 성장하는 데 필요한 영양분을 제공하게 된다.
4) Bradford assay
세포를 파쇄하여 얻은 단백질을 정량하는 방법 중 하나이다. 세포내의 pH에서 Bradford reagent는 전하를 띠게 되는데, protein의 아미노산도 전하를 띠고 있으므로 서로 결합하게 된다. 결합하게 되면 색이 갈색에서 푸른색으로 바뀌게 되는데 파장 595nm의 빛으로 관찰될 수 있다. 단백질과 결합한 bradford reagent 양이 증가할수록 빛의 흡수 역시 늘어나기 때문에 이 원리로 단백질의 양을 측정할 수 있다. 흡광도를 측정하여 표준곡선과 비교해 그 농도를 알 수 있다.

참고자료

· maintenance & culture of THP-1 cell, D. Bowdish, Bowdish Lab, McMaster University, july, 2011
· cell culture guidelines, abcam
· Penicillin-streptomycin, Mammalian cell culture, 15140122, Thermofisher scientific
· "The Use of Fetal Bovine Serum: Ethical or Scientific Problem?". Jochems, Carlo; et al 219–227. Retrieved 24 April 2012
· Hebenstreit D, Horejs-Hoeck J, Duschl A (2005). "JAK/STAT-dependent gene regulation by cytokines". Drug News Perspect.