[인천대 생명공학실험3 A+] 항체항원반응을 이용한 ELISA 실험결과 보고서 [Enzyme-linked immunosorbent assay]

소개

A+를 받은 매우 정리가 잘 되어 있는 효소 동역학적 분석, Michaelis-Menton 실험결과 보고서 입니다.
ELISA, 항원-항체반응과 항체(antibady), IgG와 Isotype 및 면역 시스템, 효소-기질 반응, 항체역가(antibody titration), Ovalbumin(OVA), Log scale과 Four Parameter Logistic(4PL) Regression에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.

목차

1. Date
2. Title
3. Purpose
4. Principle
5. Materials & Methods
6. Result
7. Discussion
8. Conclusion
9. Reference

본문내용

3. Purpose
항원항체반응을 이용한 효소결합 면역흡착법을 통해 항체역가(antibody tiltration)에 대해 알아본다.

<중 략>

5. Materials & Methods
Materials
10μg/ml ovalbumin solution, Immunoplate, T-PBS(0.1% Tween20 in PBS), 2% BSA in T-PBS, Primary antibody in T-PBS (mouse IgG antibody), anti-mouse secondary antibody in T-PBS, ABTS, 교반기
Methods
10μg/ml OVA solution 100 μl/well씩 loading(6X3) 후 4℃에서 overnight. Overnight 한 완전히 제거. 0.1% Tween20 PBS 담긴 squeeze bottle로 loading하여 3회 washing. 2% BSA를 0.1% T-PBS에 희석 후 200μl/well만큼 loading하여 1시간 동안 rocker 위에서 incubation. Washing 반복한 후 mouse IgG antibody 1:5000, 1:20000, 1:80000, 1:320000, 1:1280000으로 4배씩 희석하여 T-PBS와 100μl/well씩 loading한 후(3반복) rocker 위에서 1시간 동안 incubation. Washing 과정 반복 후 2nd antibody를 1:40000으로 희석해 100μl/well씩 loading후 30분동안 rocker에서 incubation. Washing과정을 반복한 후 ABTS solution을 100μl/well만큼 loading후 30분 동안 rocker에서 incubation. O.D. 405nm에서 흡광도 측정.

참고자료

· Robert F. Weaver. et al., 분자생물학, 2013, 라이프사이언스 p169, 185-188
· Cambell et al., 캠벨 생명과학 11th, 2019, 바이오사이언스, p79, 101,102, 708, 812
· 김평현 et al., 면역화학 및 항체공학 방법론, 2010, 강원대학교출판부, p61, 74, 176