Enzyme activity assay

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
p-NPB(p-nitrophenyl butyrate)을 CalB(Candida antarctica lipase B)의 효소에서 분해해 효소의 비활성도를 알아보는 실험이다. p-NPB가 가수분해되면 노란색의 p-nitrophenol을 생성하므로, 이때 효소를 넣지 않은 대조군과 효소를 넣은 실험군의 흡광도를 측정했다. 실험을 통해 얻은 흡광도와 흡광도 식을 이용해 농도를 구하고 UV spectrophotometer를 이용해 측정 후 효소의 활성을 알아보는 실험이다.

2. Experiment
<실험 이론>
 효소 (Enzyme)
효소란 생체 내의 화학반응을 매개하는 단백질 촉매이다. 효소는 특정 반응물과 결합해 활성화에너지(Activation Energy)를 낮춰 반응을 촉진한다. 효소와 결합하는 반응물을 기질, 효소에서 기질과 결합하는 특정 부분을 활성부위 또는 기질결합부위라고 한다. 효소의 활성부위에 기질이 결합해 효소,기질 복합체를 형성하고 반응 결과 생성물이 만들어지면 효소는 생성물과 분리되어 또 다른 반응에 참여한다. 기질의 입체구조와 효소의 활성부위가 맞아야만 결합하여 반응할 수 있으므로 한 종류의 효소는 주로 한 종류의 기질에만 작용하며 이러한 효소의 성질을 기질특이성이라 한다. 효소는 단백질 촉매이므로 단백질의 구조에 중요한 온도, pH 등의 환경조건이 효소의 활성에 중요하다.

<중 략>

4. Discussion
이번 실험은 효소 CalB(Candida antarctica lipase B)의 Enzyme activity를 알아보는 실험으로 Calb를 이용하여 p-NPB를 분해하는 능력을 정량적으로 분석한다. p-NPB를 넣은 용액에 효소를 넣으면 분해하여 생성되는 p-Nitrophenol가 노란색을 띄게된다. 이렇게 발색하는 정도를 UV spectrophotometer를 사용해서 10분에 한번씩 총 4번, 405nm에서 흡광도(ABS)를 측정하고 Lambert-Beer법칙을 통해 생성물의 농도(U)를 구한다.

참고자료

· ray D. Chiristian 외 2명, 2015, ‘분석화학’, 자유아카데미, p475~496
· Kerstin Blank, 외 3명, 2006, “ Functional expression of Canadida Antarctica lipase in Eschericha coli”, Journal of Biotechnology, 474-483
· 김예진 외 4명, 2010, “바이오디젤 생산을 위한 리파아제 고정 부직포의 효소 활성화”, 동국대학교, 한국화학공학회
· http://www.creative-biolabs.com
· http://www.ibric.org
· 2019_생물화학공학이론및실험_실험노트